田春阳 刘晓政 范军朝

微小RNA（microRNA，miRNA）是一类非编码短序列的RNA，多数miRNAs 在胃癌的组织或细胞中异常表达，参与肿瘤细胞的增殖凋亡等生物学过程，调控着胃癌的发生发展［1-2］。近年来有研究指出，miR-145 在胃癌中异常低表达，与胃癌的恶性增殖和转移关系密切［3-4］，以miR-145 为治疗胃癌靶点的研究备受关注。二甲双胍是临床上常用的一种口服降糖药，其在胃癌治疗中也表现出良好的抗肿瘤作用［5-6］。有研究指出，miR-145 联合二甲双胍具有协同抑制人结肠癌细胞株HCT116增殖的作用［7］。本研究旨在阐明miR-145 联合二甲双胍抗胃癌的可行性，并探讨其可能的分子机制，以期为胃癌的治疗提供新的策略和理论依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂

人胃癌细胞株BGC823 购于中国科学院上海细胞库。RPMI1640 培养基、新生牛血清、Trizol 试剂和Lipofectamine 2000 购于美国Invitrogen 公司。miR-145 mimic、阴性对照NC 和PCR 引物购于上海吉玛制药技术有限公司。噻唑蓝（Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide，MTT）试剂和二甲基亚枫购于Sigma-Aldrich 公司，逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）试剂和细胞裂解液购于北京全式金生物技术有限公司，甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）抗体购于Bioworld 公司，细胞周期素D1（Cyclin D1）抗体购于美国Cell Signaling Technology 公司，磷酸化蛋白激酶B（Phosphorylated protein kinase B，p-Akt）抗体、B 淋巴细胞瘤-2 基因（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）抗体、辣根过氧化酶标记的羊抗鼠/兔IgG 购于美国Santa Cruz 公司，聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜和增强化学发光（enhancedchemiluminescence，ECL）试剂盒购于美国Millipore 公司，逆转录试剂盒、凋亡检测试剂盒购于上海碧云天生物技术有限公司，二喹啉甲酸（Bicinchoninic acid，BCA）蛋白定量试剂盒购于美国Thermo 公司。

1.2 主要仪器

HERA cell240 CO2细胞培养箱购于德国Heraeus 公司，Meddel680 酶标仪、Western blot 转膜系统购于美国BIO-RAD 公司，Moflo XDP 流式细胞仪购于美国Beckmancoulter 公司，Mastercycler pro梯度PCR 仪购于美国Eppendorf 公司。……