杜伟勤，王淑峰，薛 婷

1.吕梁市人民医院医学检验科，山西吕梁 033000；2.山西医科大学第一医院医学检验科，山西太原 030001；3.山西医科大学第一医院呼吸与危重症医学科，山西太原 030001

烟曲霉是曲霉菌属中最常见一类机会致病性真菌，呈世界性分布，通过空气传播，可在免疫力低下患者中引起危及生命的侵袭性肺曲霉菌病(IPA)。唑类抗真菌药物是临床预防和治疗IPA的首选药物。近年研究发现，烟曲霉对唑类药物的耐药性日益严峻，且耐唑类药物烟曲霉引起的IPA病死率高达100%[1]。然而，临床上由于缺乏早期、快速、敏感和有效的烟曲霉检测方法，IPA患者通常无法及时诊断，进而导致治疗延误。因此，本研究对临床分离的烟曲霉菌株进行病原学检测和分子生物学鉴定，并比较了不同检测方法之间的差异，期望能够辅助临床提升诊断效率，为临床治疗提供依据。

1 材料与方法

1.1菌株来源 收集山西医科大学第一医院临床疑似肺曲霉菌感染患者痰液标本，经痰涂片、革兰染色镜检，形态学初步鉴定为曲霉菌。

1.2主要试剂 亚甲蓝染液 (珠海贝索生物技术有限公司)，六次甲基四胺、四硼酸钠(辽宁永强医药器械化玻有限公司)，氯化金溶液(Sangon Biotech公司)，甜菜碱(Sigma公司)，Bst DNA聚合酶 (New England BioLabs)，100×羟基萘酚蓝(HNB)溶液(北京百奥莱博科技有限公司)，E.coli DH5α感受态细胞，pMDTM18-T Vector Cloning试剂盒、Premix TaqTM(Ex TaqTMVersion 2.0 plus dye)、DNA Marker、琼脂糖凝胶回收试剂盒(Tiangen公司)。

1.3方法

1.3.1涂片制备及培养 无菌棉签挑取脓性痰液60～100 μL于干燥洁净载玻片右侧2/3处，均匀涂抹10 mm×20 mm左右卵圆形痰膜，自然干燥；迅速通过酒精灯外焰 3～4 次，加热固定待用。……