左 薇 穆敬平 许明军▲

1.十堰市太和医院（湖北医药学院附属医院）针灸治疗科，湖北十堰 442000；2.十堰市太和医院（湖北医药学院附属医院）睡眠心身医学中心，湖北十堰 442000

脊髓损伤（spinal cord injury，SCI）多是由运动损伤、高空坠落或交通事故等意外事故引起的脊髓结构和功能性创伤，多表现为下肢感觉与运动障碍并伴有中枢性神经痛[1-3]。另外，SCI 后期会因损伤部位及受损平面以下脊髓缺血、缺氧而引起继发性损伤，如脊髓或大脑萎缩、局部神经元坏死/凋亡及纤维传导束破坏等改变[4]。SCI 主要造成上行传导通路受损，影响脊髓回路，其中运动皮质神经元损伤导致运动功能丧失且恢复难度加大，是目前噬待解决的难题[5-6]。故如何在SCI 急性期降低痛超敏、改善自发痛行为学对减轻继发性损伤引起的严重后果在目前仍有研究的必要。基于此，本研究拟通过夹脊穴电针对实验性SCI 后中枢性疼痛模型大鼠进行治疗，观察其对SCI 的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组

SPF 级雄性SD 大鼠30 只，56 日龄，体重230～240 g，购于湖北省实验动物中心。采用随机数字表法将其分为空白对照组、SCI 组和夹脊穴组，每组10 只。实验动物质量合格证号：SCXK（鄂）2016-0008；实验动物生产许可证号：SYXK（鄂）2016-0031；福利伦理审批号：2019-17；动物饲养及实验均在湖北医药学院动物实验中心完成。实验期间大鼠自由摄食和饮水，动物房子湿度60%～70%、温度（22±1）℃。建模后动物分笼饲养并12 h 明暗交替。

1.2 实验器材

触觉测量仪（von Frey hair）购自上海施才生物科技有限公司（型号：Von Frey Hairs Von Frey Semmes）；roboz 咬骨钳购自湖南远湘生物科技有限公司（型号：RS-8305）；肌电图/诱发电位仪购自珠海市迈康科技有限公司（型号：NeuroExam M-800）；LH202H-四导韩氏穴位神经刺激仪购自北京华运安特（型号：LH202H）；脊髓打击器购自上海涵飞医疗器械有限公司（型号：IH-0400）；足底热辐射测痛仪购自上海瑞鲍生物科技有限公司（型号：Reb-200）。

1.3 实验方法

1.3.1 Allen’s 法建模 SCI 组和夹脊穴组用10%水合氯醛麻醉（3 ml/kg，腹腔注射）。大鼠卧位固定四肢、电动剃须剃除背毛，碘伏消毒后铺无菌巾。然后以记号笔标记T13～L2、切开标记区脊正中皮肤并分离浅肌层，暴露T13～L2棘突和椎板，分离椎骨和棘间肌肉及韧带，然后用RS-8305 型roboz 咬骨钳咬去L1棘突，切开椎板以充分暴露硬脊膜包被的脊髓，用IH-0400 型脊髓打击器击打L1节段脊髓，设定打击头直径：2.5 mm，损伤剂量：10 g×25 mm[7-8]。造模成功标准：硬脊膜红肿、鼠尾痉挛性摆动、双后肢回缩扑动，次日嘶叫并舔咬、搔抓尾部和后肢及躯体下部[9]。空白对照组麻醉后仅固定，不予手术造模。

1.3.2 治疗 术后次日，参考《华兴邦大鼠穴位图谱》取夹脊穴组大鼠T8～T12夹脊穴（棘突下缘两侧4 mm处）[10]。用0.25 mm×1 mm 针灸针直刺，提插捻转后接电30 min。选疏密波，刺激强度：3 mA，刺激频率：4 Hz。1 次/d，共14 d。空白对照组和SCI 组仅固定（30 min）。

1.3.3 自发痛行为学观察 由专人每天定时（4 h）观察大鼠自发嘶叫，对尾部、后肢或躯体损伤平面下部搔抓、舔咬、自噬的发生次数。

1.3.4 运动功能 ①斜板实验：将大鼠放在斜板上，从0°起、斜板逐次增加5°并以大鼠停留5 s 不滑落为准（重复3 次取均值）。②SCI 的行为学评分（Basso Beattie Bresnahan，BBB）功能评分：共分22 个等级（0～21 分），即全瘫记0 分，完全正常记21 分，评测前放入透明箱内，然后轻敲玻璃箱壁，观察关节活动的数目和范围，包括前爪、后爪、臀、踝关节行走、负重程度及前后肢协调性等，并给出相应的分值[11]。

1.3.5 疼痛评估 机械性痛阈采用von Frey hair 法测定痛阈（损伤平面下端躯干对非伤害性机械性轻压和轻触及引起50%前爪抬足的疼痛反应阈值[7]）。大鼠热痛阈（paw withdrawal latency，PWL）和热缩足潜伏期（thermal paw withdrawal latencies，PWLs）采用足底热辐射测痛仪测定[12]。重复3 次取均值。

1.3.6 脊髓运动诱发电位（spinalcordmotorevoked potential，scMEP）及体感诱发电位（somatosensory evoked potential，SEP）测定 将大鼠麻醉，卧位固定四肢、采用单极经皮层电刺激记录MEP；直流电刺激以触发SEP 并记录之（重复3 次取均值）。

1.4 统计学方法

采用SPSS 21.0 统计学软件对所得数据进行分析，计量资料采用均数±标准差（）表示，组间比较采用t 检验；计数资料采用例数或百分率表示，组间比较采用χ2检验。以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组行为学及运动功能结果比较

SCI 组自发嘶叫，对尾部、后肢或躯体损伤平面下部搔抓、舔咬、自噬的发生次数较空白对照组显著增多，SCI 组BBB 功能评分和斜角显著降低，差异有统计学意义（P ＜0.05）。夹脊穴组自发嘶叫，对尾部、后肢或躯体损伤平面下部搔抓、舔咬、自噬的发生次数较SCI 组明显降低，BBB 功能评分和斜角明显提高，差异有统计学意义（P ＜0.05）。见表1。

表1 三组行为学及运动功能观察结果比较（）

注：与空白对照组比较，aP ＜0.05；与SCI 组比较，bP ＜0.05。SCI：脊髓损伤

2.2 三组疼痛评估结果比较

SCI 组大鼠PWLs、PWL 及损伤平面下端躯干对非伤害性机械性轻压和轻触及引起50%前爪抬足的疼痛反应阈值均较空白对照组显著降低，痛超敏发生率明显升高，差异有统计学意义（P ＜0.05）。与SCI 组比较，夹脊穴组PWL、PWLs 及损伤平面下端躯干对非伤害性机械性轻压和轻触及引起50%前爪抬足的疼痛反应阈值明显提高，痛超敏发生率降低，差异有统计学意义（P ＜0.05）。见表2。

表2 三组疼痛评估结果比较

2.3 三组scMEP 和SEP 比较

与空白对照组比较，SCI 组scMEP 早成份N1和N2波峰值降低，SEP、N 波和P 波明显延长，差异有统计学意义（P ＜0.05）。与SCI 组比较，夹脊穴组scMEP早成份N1和N2波升高，SEP、N 波和P 波则明显缩短，差异有统计学意义（P ＜0.05）。见表3。

表3 三组scMEP 和SEP 比较（）

表3 三组scMEP 和SEP 比较（）

注：与空白对照组比较，aP ＜0.05；与SCI 组比较，bP ＜0.05。scMEP：脊髓运动诱发电位；SEP：体感诱发电位；SCI：脊髓损伤

3 讨论

SCI 致残率高、治愈率低[13]。中枢性疼痛和损伤平面以下自主神经功能障碍及躯体运动功能障碍是SCI 的主要临床表现[14]。而在急性期除感觉异常外还表现出严重的痛超敏伴行为学改变[15-16]。动物表现为搔抓、舔咬下肢及自噬[17]。已有研究表明电针治疗具有促进SCI 神经修复的作用[18]。但多应用于SCI 慢性期，而对于急性期治疗还有待动物实验验证。

SEP 主要反映脊髓感觉和上行运动传导通路的功能，当发生SCI 后，记录到的SEP 潜伏期延长、N 波和P 波信号衰减[19-20]。本研究观察到的SCI 组的变化也显示SCI 造成的伤害性刺激持续存在或以SCI 为主的中枢性疼痛持续时间延长。因SEP 对脊髓上行传导通路的传导信号有较高的准确性和灵敏性，常用于评价SCI 程度[21]。而SCI 时scMEP 早成份N1和N2波峰值也明显降低甚至消失，故也可作为更为灵敏的脊髓功能评价指标[22]。本实验观察到夹脊穴组自发嘶叫及对尾部、后肢和躯体下部搔抓、舔咬及自噬现象的发生次数较SCI 组明显减少，且PWL 痛阈提高，PWLs 延长。提示夹脊穴低频电针可改善SCI 自发痛引起的行为学异常现象并提高对SCI 痛超敏的耐受性。夹脊穴组P、N 波和SEP 潜伏期均缩短，scMEP早成份N1和N2波峰值升高，提示夹脊穴电针可降低SCI 造成的伤害性刺激持续强度和持续时间，使脊髓传导束传导功能趋于正常[23]。

由于脊髓与中医督脉的功能相似，故SCI 与中医“痿证”中“督脉损伤”相符[24]。而夹脊穴紧邻督脉，夹脊电针可改善SCI 区域微环境并促进神经修复并提高生活质量[25]。夹脊穴组斜板倾斜度和BBB 评分升高，提示SCI 中枢性疼痛模型大鼠运动功能得以部分恢复，这也间接证明电针督脉可疏通“督脉损伤”之经络、促进神经传导功能和运动功能恢复。

综上所述，及时的夹脊穴电针可减轻实验性SCI后中枢性疼痛模型大鼠痛超敏、促进SCI 后运动功能的恢复并改善自发痛行为学异常现象，其机制可能与夹脊穴电针提高痛阈、疏通“督脉损伤”之经络而促进神经传导功能恢复有关。