陈秀兰

福建省老年医院呼吸与危重症医学科,福建省福州市 350001

慢性阻塞性肺病(Chronic obstructive pulmonary disease，COPD)是一种严重威胁全球公众健康的慢性呼吸道疾病，尤其是老年患者，以不完全可逆的气流受限为特征，已证实病情的发展与抽烟、环境污染、感染等存在明显关系，由于异常炎症反应的持续存在，进行性的削弱机体免疫功能，包括体液免疫和细胞免疫[1]。目前，对不同GOLD分组的COPD患者肺泡灌洗液中免疫球蛋白、淋巴细胞亚群、诱导型一氧化氮合成酶(inducible Nitric Oxide Synthase，iNOS)的相关性研究尚少。本文以不同分组COPD患者作为研究对象，检测其Ig、淋巴细胞亚群、iNOS的水平，并探讨各组免疫状态及与iNOS相关性。

1 对象与方法

1.1 研究对象 160例COPD患者均为我院住院或门诊的患者，均符合慢性阻塞性肺病诊断标准《慢性阻塞性肺疾病基层诊疗指南(2018年)》[2]。所有COPD患者以肺功能水平(第1秒呼气容积占预计值的百分比FEV1%pred)进行分组。其中，A组为FEV1pred≥80%；B组为50%≤FEV1pred<80%；C组为30%≤FEV1pred<50%；D组为FEV1pred<30%。A组40例，男25例，女15例，平均年龄(66.67±11.34)岁；B组40例，男24例，女16例，平均年龄(69.58±12.19)岁；C组40例，男26例，女14例，平均年龄(69.54±11.26)岁；D组40例，男22例，女18例，平均年龄(71.21±13.41)岁；选取同期健康者40例作为对照组，男20例，女20例，平均年龄(66.74±10.26)岁。比较五组研究对象一般资料，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性，且所有研究对象均经过我院伦理委员会要求，同时签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 免疫比浊法：免疫球蛋白试剂(德国罗氏公司)，采用日立全自动生化分析仪检测各组肺泡灌洗液中IgA、IgG、IgM的表达。

1.2.2 淋巴细胞亚群检测：流式细胞仪分析CD4+、CD8+T、B和NK淋巴细胞亚群(Beckman Navios型号)，八色荧光抗体试剂(Beckman公司提供)。

1.2.3 RT-PCR检测iNOS mRNA的表达：每组取1ml的肺泡灌洗液悬液，加入200μl的Trizol裂解液中，先提取总RNA，并按照逆转录试剂说明书逆转录为cDNA，iNOS和β-actin引物序列，见表1。扩增PCR反应体系，反应条件：94℃预变性90s；94℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸30s，循环40次；最后72℃延伸5min。每份标本3个复孔，复孔间Ct值差异<0.5，以β-actin为内参，Ct值减去内参的Ct值作为△Ct，用2-△△Ct表示目的基因的表达量。