柏 玲,陈 晨

工作压力的增大、环境有害物质的增加等多种因素作用，使女性卵巢功能损伤、生育能力下降的问题逐渐显现，亟待解决[1]。颗粒细胞是卵泡发育和闭锁过程中最重要的参与细胞,通过与卵泡膜相互作用以维持正常的卵巢功能[2]。研究中我们发现miR-223在卵巢颗粒细胞中表达，文献资料显示miR-223与IGF-1R基因存在靶向调控作用[3]，目前尚无miR-223通过靶向下调IGF1R-AKT/mTOR通路对卵巢颗粒细胞增殖及其凋亡产生影响的文献资料报道，为进一步验证这一假设，我们设计了本次研究，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：本研究于2019年6月-2019年12月在宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室完成，人卵巢颗粒细胞购自ATCC公司，miR-223慢病毒购自VectorBuilder公司，蛋白抗体购自北京博奥森生物技术有限公司(IGF1R兔抗人抗体，bs-4985R；p-S6K1兔抗人抗体，bs-5669R；p-4EBP1，bs-14550R;山羊抗兔二抗，bs-0295G-HRP)。实验依据细胞处理方式分为以下3组：①正常对照组为细胞常规培养；②慢病毒对照治疗组为正常对照组细胞转染对照慢病毒；③miR-223 Mimics组(Mimics组)为正常对照组细胞转染miR-223 Mimics慢病毒，各组细胞于慢病毒转染72 h后收集细胞进行后续实验，每组3个重复。

1.2 细胞培养：SVOG细胞培养液为1 640培养液+10%胎牛血清+1%双抗。培养条件：37 ℃恒温培养箱，95%空气+5%二氧化碳。细胞融合80%左右按1∶3进行传代。

1.3 CCK8细胞增殖检测：采用0.25%胰酶消化收集各组细胞，细胞计数板计数，然后将上述各组细胞分别接种于96孔板中，每空104个细胞，每组3个重复。接种后0、24、48 h加入100 μl含10% CCK8工作液的完全培养液，37 ℃培养箱孵育2h后，取出96孔板，采用酶标仪检测各孔细胞OD值。……