骆婷婷,刘 洋,张 瑞,于文燕

(1新疆医科大学第一附属医院血液病中心实验室,乌鲁木齐 830054;2新疆医科大学基础医学院;*通讯作者,E-mail:945265580@qq.com)

急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)是一类血液系统恶性肿瘤,其特征主要是血液和骨髓中髓系原始细胞的异常克隆扩增[1],在我国常见于成人,且发病率随着年龄的增长呈上升趋势[2,3]。现已研究确定该病主要生物学特征是细胞增殖失控,治疗手段也主要针对这一生物学特征进行,但是,还是存在一部分患者停药复发等问题[4]。随着对白血病发病分子机制深入研究,靶向治疗成为白血病治疗的发展趋势[5]。赖氨酸特异性去甲基化酶6A(lysine-specific demethylase 6A,KDM6A)主要是组蛋白H3的第27位赖氨酸(histone H3 at lysine 27,H3K27)去甲基化酶,可以催化H3K27三甲基化(H3K27 tri-methylated，H3K27me3)去甲基化，促进基因表达,在胚胎发育过程中起到重要的作用[6,7]。已有研究报道,KDM6A突变和缺失参与多种肿瘤的发生发展,包括食管癌、结肠癌、膀胱癌、多发性骨髓瘤[8-11]等。但KDM6A在急性髓系白血病中作用尚不清楚。本实验分别通过过表达和敲减KDM6A基因,来观察对急性髓系白血病细胞增殖、凋亡的影响。

1 材料与方法

1.1 材料和试剂

人组织细胞淋巴瘤细胞U937购自美国ATCC(货号:DA-C5751)。BCA蛋白检测试剂盒(货号:23250)、MTT检测试剂盒(货号:4890-025-K)购自上海嵘崴达实业有限公司;Annexin Ⅴ-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒(货号:556547)及流式细胞仪购自美国BD公司;脂质体LipofectamineTM2000(货号:11668027)购自美国Invitrogen;PrimeScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser Kit(Perfect Real Time)(货号:RR047AA)、SYBR Premix Ex TaqTM(Tli RNaseH Plus)(货号:RR820A)购自日本TAKARA公司;GAPDH兔多抗购自美国Bioworld公司;兔抗人KDM6A(货号:ab36938)、兔抗人H3K27me3(ab192985)、兔抗人Caspase-3(货号:ab13748)购自美国Abcam;兔抗人c-Myc(货号:MAB3696)、兔抗人Cyclin D1(货号:MAB4314)、兔抗人Bcl-2(货号:MAB8272)、兔抗人Bax(货号:MAB846)购于美国R&DSYSTEMS;辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔二抗(货号:sc2004)购自美国Santa Cruz公司。……