赵美英史文倩汪桂青

(郑州大学附属郑州中心医院老年科，郑州 450007)

阿尔兹海默症(alzheimer’s disease，AD)日益成为全球性疾病，影响患者个人健康，淀粉样蛋白假说是目前主流的AD发病理论，淀粉样β蛋白(amyloid-βprotein，Aβ)聚集影响神经元功能，是导致认知功能障碍和痴呆的诱因，且临床上尚无根治药物[1]。靶向分子治疗成为近年来研究热点，长链非编码RNA(long non-coding RNA，LncRNA)参与神经元发育、增殖、凋亡、神经可塑性、认知、运动等多种功能[2]；生长抑制特异因子5(growth arrestspecific 5，GAS5)作为一种LncRNA，最早在增殖抑制的细胞中被发现，且可促进多种细胞凋亡，在胶质瘤细胞中表达升高可促进胶质瘤细胞的凋亡，但其在AD中发挥何种作用，尚未发现研究[3]。研究报道，GAS5可以靶向微小RNA(microRNA，miRNA)影响疾病[4－5]。miR-137可抑制细胞外Aβ沉积，从而调控下游靶基因，抑制神经元死亡、缓解凋亡过程，从而缓解AD[6]。且研究发现，GAS5可靶向miR-137影响缺血再灌注损伤，但在神经元损伤中尚未发现相关研究[7]。因此，本研究采用Aβ诱导大鼠构建AD模型，探讨GAS5调控miR-137对大鼠神经元损伤的影响。

1 材料和方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物

60只6周龄SPF级雄性健康SD大鼠购自中科院上海斯莱克实验动物有限公司[SCXK(沪)2017-0005]，体重(160±10)g。大鼠在温度(24±1)℃、湿度(50±5)%、12 h昼夜节律。黑暗条件下自由摄食饮水，正常饲养，饲养于郑州大学(药物研究院)[SYXK(豫)2018-0004]，1周后开始实验。本研究经本院伦理协会审核并通过(IACUC-20190106)，实验动物符合3R原则。

1.1.2 细胞

大鼠海马神经元购自中国医学科学院基础医学研究所基础医学细胞中心。

1.2 主要试剂与仪器

Aβ购自美国Sigma公司；si-NC、si-GAS5、anti-miR-NC、anti-miR-137、GAS5 MUT、GAS5 WT、miR-137 mimic、miR-137 mimic NC均购自广州锐博生物科技有限公司；……