王凯杰，周哲伦，姜茹予，王晴晴，雷玉恬，王 莎

(湖州师范学院 医学院、护理学院，浙江 湖州 313000)

近年来，随着广谱抗生素、抗肿瘤药物、肾上腺皮质激素、免疫抑制剂等的广泛应用甚至滥用，以及器官移植和外科介入性治疗，菌群失调以致机体对真菌的抵抗力降低，侵袭性曲霉病(invasive aspergillosis, IA)感染的发生呈现上升趋势，成为了器官移植手术、白血病等重症免疫受损患者死亡的主要原因，病死率高达60%～100%[1-3].目前，治疗深部曲霉感染的临床应用一线药物是三唑类抗真菌药物(trizoles)，如伊曲康唑(itraconazole)、伏立康唑(voriconazole)和泊沙康唑(posaconazole)[3-4].唑类药物通过与麦角固醇合成途径中的关键酶细胞色素P450羊毛甾醇14α-脱甲基酶(Erg11A/Cyp51A基因编码)结合，以抑制麦角固醇的合成并造成毒性固醇中间体的积累，从而抑制真菌的生长[5].然而，研究发现越来越多的临床分离菌对唑类药物会产生耐药性[6-7].因此，烟曲霉的耐药机制已经成为当前研究的一个重要领域.

本实验室前期建立了以根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导的T-DNA(Transfer DNA)随机插入的烟曲霉突变菌株库，其中编号为T478号的烟曲霉菌株对伊曲康唑耐药.本研究以T478号菌株为出发菌株，利用Tail-PCR技术扩增该突变体中被T-DNA破坏的基因片段，并通过测序鉴定到该突变基因，进一步利用基因敲除技术在野生型菌株中敲除该基因，以观察验证该基因是否参与对伊曲康唑耐受性的调控.

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

烟曲霉野生型菌株A1160来自FGSC(http://www.fgsc.net/)，A1160c野生型对照菌株来自本实验室菌库，pim1插入突变菌株(T478)和敲除……