石晓岚，赵 龙，王 宁，刘翠翠，王 静，马彩铃

(西安市儿童医院呼吸哮喘中心，陕西 西安710002)

我国哮喘患者大约在3000万，且一半以上的哮喘患者在儿童期发病[1]。儿童哮喘如未得到及时治疗，可能会出现喘息、咳嗽等症状，严重影响其生活质量，甚至威胁其生命。因此，阐明哮喘的发病机制，开发新的治疗靶点具有重要意义。近年来，非编码RNA的作用已成为一个重要的研究领域，其中，微小核醣核酸(microRNAs，miRNAs)通过结合保守的种子序列来靶向信使RNA(mRNA)转录，进而调节多种不同的疾病，如哮喘、肺病和癌症[2-6]。据报道，miR-542-3p的过表达能抑制反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘[anti-benzo(a)pyrene-7,8-diol-9,10-epoxide，anti-BPDE]诱导人支气管上皮细胞16HBE-T的增殖和迁移[7]。但miR-542-3p在儿童哮喘中的作用及分子机制尚不明确。本研究发现miR-542-3p通过IL-33/sST2信号通路来抑制脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)处理的BEAS-2B细胞的增殖和迁移，为研究治疗儿童哮喘的新方法提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 实验材料 MEM培养基(Gibco公司，美国)；脂质体RNAiMAX(Invitrogen，美国)；Trizol试剂(Invitrogen，美国)；TaqMan逆转录试剂盒(Takara Bio，日本)；microRNA反转录试剂盒(Applied Biosystems，美国)；SYBR Fast qPCR Mix(Takara Bio，日本)；内参U6(广州锐博生物科技公司)；酶活性测定试剂盒(Promega公司，美国)；CCK8(同仁公司，日本)；SDS-PAGE凝胶配制试剂盒P0012A(上海碧云天公司)；5920R低温高速离心机(Eppendorf公司，德国)；酶标仪(TZCAN公司，奥地利)。

1.2 研究方法

1.2.1 细胞培养及转染：将人支气管上皮细胞系BEAS-2B培养在含10%(V/V)胎牛血清的MEM培养基，置于含5%CO2(V/V)的37 ℃培养箱中。LPS(0.1、1、10、100 μg/ml)处理BEAS-2B细胞24 h构建哮喘模型。等体积DMSD处理BEAS-2B细胞作为未处理组(Untreated)。将密度为2×105的BEAS-2B细胞接种至6孔板上，待细胞融合度为80%时，用脂质体RNAiMAX转染mimic NC、inhibitor NC、miR-542-3p+pcDNA3.1至BEAS-2B作为空载组。转染miR-542-3p mimic(miR-542-3p)、miR-542-3p-inhibitor，miR-542-3p+pcDNA3.1-IL-33至BEAS-2B作为实验组。……