周蓓 樊利春 吴沉昊 王婧

乳腺癌具有异质性，治疗方案因人而异。手术、靶向药物有了很大发展，但治疗效果仍不明显。TSPAN13(又称NET-6)属于四肽超家族，染色体位于7p21.1，TSPAN13基因编码含204个氨基酸的蛋白质，参与了一系列的生物学过程，包括分化、凋亡、增殖和转移等[1]。Iwai等[2]研究发现，乳腺癌细胞株细胞中TSPAN13低表达，是乳腺癌的抑癌基因。我们采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR)及Western blot法检测了乳腺癌组织中TSPAN13表达，分析TSPAN13表达水平与临床病理特征的关系。

对象和方法

一、对象

2017年1月～2019年1月我院接受乳腺癌根治手术治疗的乳腺癌病人96例。纳入标准：(1)女性，均明确诊断为乳腺癌；(2)术前未行放化疗、内分泌治疗等；(3)临床资料完整；(4)签订知情同意书，并上报医院伦理道德委员会批准。排除标准：合并其他器官肿瘤；严重精神疾病；合并严重的心、肝、肾疾病。96例相应的癌旁正常乳腺组织(距癌灶>5 cm)作为正常组。10例良性病变组织(纤维腺瘤)作为对照。96例乳腺癌病人一般资料见表1。

表1 病人基线资料

二、方法

1.qRT-PCR法检测组织中TSPAN13 mRNA表达水平：超声粉碎组织，PBS溶液洗涤溶解，加入等体积TRIzol试剂。根据试剂盒说明书提取总RNA，溶于20 μl DEPC水，取1 μl加入79 μl DEPC水测OD260/OD280检测纯度。根据反转录试剂盒(武汉博士德公司)合成cDNA，样品总RNA 1 μg，随机引物或oligo-dT(18-20) 100 pmol，脱氧核苷三磷酸(每种dNTP各10 mmol/L) 1 μl，反转录缓冲液(5×) 4 μl，RNase抑制剂(20～40 U/μl ) 1 μl，M-MLV反转录酶20 U，DEPC处理水补至20 μl，目标引物序列由北京华大基因生物有限公司合成(表2)。根据试剂盒说明书进行PCR扩增：cDNA 2 μl、上下引物各3 μl、Taq聚合酶0.5 μl，总体积共25 μl，反应参数设置为92 ℃ 20 s、96 ℃ 2 s、85 ℃ 20 s、80 ℃ 6 s，共40个循环。构建溶解曲线，2-△△Ct法表示目标引物mRNA的相对表达量。