董莉丽，冯 磊，杨 然，李 松，饶玉梅

(1.南阳市中心医院 妇科，河南 南阳 473000;2.郑州大学第一附属医院 妇科，河南 郑州 450000)

卵巢癌(ovarian cancer)是妇科常见3大恶性肿瘤之一，过去10年间，中国卵巢癌发病趋于年轻化，发病率增长30%，病死率增加18%[1]。由于卵巢癌发病隐匿且缺少确切前期诊断方式，70%以上确诊时已进入中晚期，多数发生侵袭与转移，失去手术机会，仅能采取放射治疗、化学药物治疗等姑息治疗措施，预后差[2]。因此，探索抑制卵巢癌细胞迁移和侵袭的有效方式，对改善其预后有重要意义。内质网蛋白29(endoplasmic reticulum protein 29，ERP29)是影响细胞增殖、转移的内质网蛋白之一，在多种肿瘤细胞中异常表达，参与乳腺癌、肺腺癌及结直肠癌的发生与发展[3-5]。本课题组经前期研究发现ERP29在卵巢癌组织中异常低表达，ERP29可能作为抑癌基因参与发病进程，但关于其对卵巢癌细胞侵袭、迁移的影响及具体机制仍需进一步探讨。本研究建立过表达ERP29的OVCAR3细胞系，探讨其对细胞迁移、侵袭的影响，并探讨相关机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞系:人卵巢癌细胞系OVCAR3(中国科学院上海细胞库)，保存于液氮中。

1.1.2 主要试剂:携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)的真核表达载体pcDNA3.1-ERP29质粒、阴性对照载体pcDNA3.1 empty质粒(上海吉玛制药技术有限公司)；LipofectamineTM2000试剂盒(Invitrogen公司)；实时荧光定量聚合酶链反应(real-time-quantitative-polymerase chain reaction，RT-qPCR)SYBR Ⅱ试剂盒、二喹啉甲酸(bicinchoninic acid，BCA)蛋白定量分析试剂盒(Thermo Fisher Scientific公司)；蛋白激酶B(protein kinase B，AKT)、p-AKT、雷帕霉素靶蛋白(mam-malian target of rapamycin，mTOR)、p-mTOR、真核生物始动因子4E结合蛋白1(4E binding protein，4EBP1)、p-4EBP1一抗(Bio-Rad公司)。

1.2 方法

1.2.1 细胞的培养、转染及分组：将OVCAR3细胞培养于RPMI-1640培养基中(10%胎牛血清+1%抗青霉素、链霉素混合液)，常规条件5% CO2、37 ℃下培养至对数期行后续实验。……