唐卫平，李 翀，陈国栋，赵 磊

(南华大学附属第一医院 1.肝胆胰外科；2.胃肠外科，湖南 衡阳 421001)

脾功能亢进是肝硬化门静脉高压症的常见严重并发症，可增加静脉曲张破裂出血和肝硬化失代偿风险[1]。脾切除术或脾动脉栓塞术常用于治疗肝硬化继发性脾功能亢进，能有效降低门静脉压力、增加血细胞计数、改善肝功能并促进肝再生[2]。近年来，干细胞移植疗法作为肝硬化治疗领域的前沿热点被寄予厚望[3-4]。研究表明，间充质干细胞移植后能够归巢到损伤部位并通过替代受损细胞或者分泌细胞因子等方式促进组织再生，而脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSCs)因易采集、增殖能力强以及抗感染等特征在组织重建和细胞移植应用方面广受关注[5-6]，但脾脏切除对ADSCs的治疗效果和归巢效率的影响尚不明确。

本研究建立肝硬化大鼠模型，通过在干细胞移植前行脾切除手术，探讨脾切除对ADSCs移植在治疗肝硬化(抗肝纤维化、抑制肝损害、调节肝脏合成功能)以及增加肝脏归巢效率的影响，阐明脾切除在ADSCs治疗肝硬化脾亢中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物：SPF级6周龄雄性SD大鼠40只，体质量180～220 g [南华大学医学院实验动物中心，动物许可证：SYXK(湘)2015-0001]。

1.1.2 试剂：Ⅳ型胶原酶、PBS和Accutase细胞消化液(Innovative Cell Technologies公司)；αMEM培养基、胎牛血清、软骨诱导培养基、脂肪诱导培养基、阿尔新蓝(Alcian Blue)、四氯化碳、橄榄油、油红O(Oil Red O)、Qtracker 705 Cell Labeling Kit、引物collagen Ⅰ(上游5′-TGTAAAACGACGGCCAGT-3′，下游5′-CAGGAAACAGCTATGACC-3′)；β-actin上游5′-TGTAAAACGACGGCCAGT-3′，下游5′-CAGGA AACAGCTATGACC-3′(Invitrogen公司)；RNA提取试剂盒(北京艾德莱生物科技有限公司)；反转录试剂盒(日本东洋纺公司)。

1.2 方法

1.2.1 大鼠ADSCs的分离、培养及鉴定：按以往建立的方法[7]分离培养ADSCs，行脂肪和软骨诱导分化后分别行油红O和Alcian Blue染色，细胞免疫荧光染色鉴定表面标志物。……