高 静，周家奇

(1.浙江大学医学院附属儿童医院 麻醉科，浙江 杭州 310000；2.浙江大学医学院第一附属医院重症医学科，浙江 杭州 310000)

肝肺综合征(hepatopulmonary syndrome,HPS)是在慢性肝病和/或门脉高压的基础上出现肺内微血管异常扩张(intrapulmonary vascular dilation,IPVD)、血管新生而导致的氧合异常综合征，也是引起围术期移植肝无功能及肺部感染的主要原因[1-3]。既往研究认为肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells,PMVECs)的异常增殖、迁移引起肺血管重塑在其中发挥了重要作用[4-5]。本课题组前期研究发现脂筏(lipid raft)在血管内皮细胞异常增殖和迁移过程中发挥了重要重用，但其确切机制不清。本研究发现脂筏内integrin β1通过激活integrin β1/FAK通路进而促进细胞增殖、迁移和血管内皮生成因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的分泌，可能介导了肝肺综合征的肺血管重塑过程。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 大鼠及细胞：雄性SD大鼠(SPF级，250～300 g/只，浙江省医学科学院动物中心)；原代大鼠肺微血管内皮细胞(Cell Biologics公司)。

1.1.2 试剂及试剂盒：CCK-8试剂、甲基-β-环糊精(MβCD)(Sigma-Aldrich公司)；ECM培养基(Science Cell公司)；胰蛋白酶(Gibco公司)；DMSO(国产分析纯)、VEGF-ELISA试剂盒(依科赛公司)，青霉素-链霉素溶液(上海碧云天生物技术有限公司)，HRP标记山羊抗小鼠二抗、HRP标记兔抗山羊二抗、抗 FAK 鼠单克隆抗体和抗 pY397FAK 兔单克隆抗体(北京康为生物科技有限公司)，EntransterTM-R(北京英格恩生物科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 HPS大鼠血清的制备：腹腔注射3%戊巴比妥钠 (0.1 mL/100 g)麻醉，沿腹正中进腹，暴露并充分游离胆总管，分别在近肝门处和近十二指肠处结扎并剪断，关腹[4]。建模后4周在无菌操作下抽取腹主动脉血，4 ℃离心取上清，56 ℃加热30 min以灭活补体，-80 ℃保存。……