苏长英，孟艳红，吴美龄

经皮冠状动脉介入治疗心肌梗死虽然取得一定成效，但可造成心肌缺血再灌注损伤，并发心律失常、心力衰竭等严重后果。研究发现，心肌细胞凋亡和氧化损伤等与缺血再灌注损伤密切相关。内质网应激是体内氧化应激最重要的形式之一，可参与各种糖尿病心肌病、阿尔兹海默病等疾病及严重并发症的发生。内质网应激相关蛋白1（SERP1）是一种可缓解内质网应激损害的未折叠蛋白应答反应的重要伴侣蛋白，可在内质网应激导致的组织细胞凋亡及自噬中发挥重要缓解作用。然而目前关于SERP1对心肌细胞的影响尚鲜有研究，因此，2018年1—12月进行本研究，拟通过过表达SERP1基因后探究其与缺氧/复氧（Hypoxia reoxygenation anoxia/reoxygenation，H/R）诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡的缓解作用。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

大鼠H9c2心肌细胞系来自中国科学院上海细胞库；本研究符合一般动物实验伦理学原则。无糖DMEM培养基（货号11966-025）、胎牛血清（FBS，货号10099141）均购自美国Gibco；pCMV6-网应激相关蛋白1（pCMV6-SERP1）过表达质粒、pCMV6空载质粒（美国Origene公司）、Trizol试剂（货号R0016）、蛋白抽提试剂盒（批次P0028）、二喹啉甲酸（BCA）蛋白定量试剂盒（批次P0010S）、甲基噻唑蓝（MTT）试剂盒（批次C0009）、Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒（批次C1062S）购自上海碧云天有限公司；PrimeScript™RT reagent Kit（Perfect Real Time）（编号RR037A）、TB GreenPremix Ex Taq™Ⅱ（Tli RNaseH Plus）（编号RR820A）购自TaKaRa生物公司；引物由上海吉玛生物科技有限公司合成；半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）活性检测试剂盒（货号CASP3F）购自美国Sigma；Lipofectamine2000转染试剂盒（货号11668-0.75mL）、鼠源一抗三磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）（货号AM4300）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）（货号13-8800）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）（货号MA5-13994），一抗兔源内质网应激相关蛋白1（SERP1）（货号PA5-21385）、二抗羊抗鼠免疫球蛋白G（IgG）（货号A-11001）、羊抗兔IgG（货号A-11008）均购自美国Invitrogen；……