刘敏，吴运

配子生成素结合蛋白2（GGNBP2）也被称为ZFP403，在乳腺癌（包括三阴性乳腺癌）、胶质瘤组织及卵巢癌组织和细胞中表达下调，过表达GGNBP2可抑制癌细胞增殖、迁移和侵袭。微小RNA-494-3p（miR-494-3p）在肝细胞癌（HCC）组织表达上调并与HCC病人的预后不良和癌细胞转移有关。miR-494-3p在人脑胶质瘤组织和鼻咽癌中表达上调，抑制miR-494-3p可抑制胶质瘤细胞的侵袭、增殖并促进细胞凋亡，抑制鼻咽癌细胞的迁移和侵袭。然而miR-494-3p和GGNBP2对结直肠癌发生发展的影响尚未可知。本研究于2019年1月至2019年12月以人结直肠上皮细胞NCM460为对照，首先检测了结直肠癌细胞系T84、LS1034、HCT116中miR-494-3p和GGNBP2表达；然后以LS1034为研究对象，探讨miR-494-3p能否靶向GGNBP2影响结直癌细胞侵袭、迁移及上皮间质转化（EMT），以期为结直肠癌的治疗提供新的分子靶标。

1 资料与方法

1.1 一般资料

人结直肠癌细胞株T84、LS1034、HCT116和人结肠上皮细胞株NCM460购自美国ATCC；胎牛血清（FBS）、DMEM/F-12培养基和RPMI-1640培养基购自美国Gibco公司，牛血清白蛋白（BSA）、四基噻唑基四唑（MTT）、二甲基亚砜（DMSO）和胰蛋白酶购自美国Sigma-Aldrich公司；Transwell板购自美国Corning公司；miR-494-3p模拟物（mimics）和抑制剂（anit-miR-494-3p）、GGNBP2小干扰RNA（si-GGNBP2）和过表达载体（pcDNA-GGNBP2）、模拟对照序列（miR-con）、抑制剂阴性对照序列（anti-miR-con）、小干扰RNA阴性对照（si-con）、空载体（pcDNA-con）、GGNBP2野生型（WT-GGNBP2）和突变型（MUT-GGNBP2）荧光素酶报告载体购自上海吉玛制药有限公司；GGNBP2、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、磷酸化蛋白酪氨酸激酶2（pJak2）、磷酸化信号转导和转录活化因子3（p-STAT3）及β-肌动蛋白（β-actin）抗体购自英国Abcam公司；荧光素酶活性检测试剂盒购自美国Promega公司；Lipofectamine 2000转染试剂、RNA提取试剂TRIzol、real-time PCR试剂盒、反转录试剂盒购自美国Invitrogen公司；……