宋现静，刘明，吕文山

糖尿病肾病属于糖尿病慢性并发症，随着疾病发展可引发终末期肾病。既往研究显示免疫与炎症反应失衡与糖尿病肾病病人足细胞损伤密切相关。研究表明微小RNA-103（miR-103）在2型糖尿病大鼠外周血单核细胞中高表达。TargetScan预测显示钙调磷酸酶调节蛋白RCAN 1（regulator of calcineurin 1，RCAN 1），可能是miR-103的靶基因，研究表明敲除RCAN1可加重阿霉素肾病小鼠的蛋白尿及足细胞损伤。本研究从2018年1月至2019年1月期间主要探究miR-103在高糖诱导的足细胞中的表达变化，分析干扰miR-103的表达对高糖诱导的足细胞凋亡及炎性因子分泌的影响，初步探讨miR-103对RCAN1的调控作用。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

人足细胞（human podocytecell，HPC）购自美国ATCC细胞库。Trizol试剂、RT Reagent Kit With gDNA Eraser与SYBR Premix Ex Taq试剂均购自日本TaKaRa公司；兔抗人RCAN1、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bcl-2-associated X protein，Bax）、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）抗体均购自美国Abcam公司；HRP标记的山羊抗兔免疫球蛋白（IgG）二抗购自北京中杉金桥生物技术有限公司；白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）检测试剂盒购自上海江莱生物股份有限公司；miR-103特异性寡核苷酸抑制剂（anti-miR-103）及其阴性对照（anti-miR-con）、miR-103寡核苷酸模拟物（miR-103 mimics）及 阴 性 对 照mimic NC序 列（miR-con）、RCAN1小分子干扰RNA（si-RCAN1）及其阴性对照（si-con）均购自上海吉玛制药技术有限公司；细胞凋亡检测试剂盒购自上海翊圣生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养及实验分组HPC细胞接种于6孔板，待HPC细胞分化成熟进行高糖刺激，25 mmol/L高糖分别刺激6、12、24 h，检测各组足细胞凋亡率，筛选适宜浓度进行后续实验。实验分组：正常糖组（NG组）、高糖（HG）6 h组、HG12 h组、HG 24 h组。干扰miR-103表达对高糖刺激人足细胞凋亡和炎性因子分泌的影响。……