云南省某腹泻仔猪群猪流行性腹泻病毒核酸检测及其N 基因序列分析
2021-10-10张振兴宋建领
张振兴,王 斌,宋建领
(1.云南省畜牧兽医科学院,云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室,云南昆明 650224;2.威信县动物疫病预防控制中心,云南威信 657900)
猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起仔猪和育肥猪的一种急性接触性肠道传染病,主要表现为呕吐、腹泻、脱水,多发生于哺乳仔猪,对哺乳仔猪具有高致死率[1]。PED 最早发生于1971 年的英国,1978 年比利时人Pensaert 等[2]首次分离鉴定出该病病原。2010 年后变异PEDV 毒株在中国、韩国、日本迅速蔓延,2013 年4 月扩散至美国,造成了严重经济损失,至今仍对全球养猪业危害巨大[3-4]。
PEDV 属于套式病毒目(Ni-dovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)甲型冠状病毒属(Alphacoronavirus)。其基因组核酸为单股正链RNA,基因组长度约为28 kb,编码4 个结构蛋白(S、E、M 和N)和 4 个非结构蛋白(1a、1b、3a 和3b)[5]。N 蛋白是病毒粒子核衣壳的主要成分,通过结合RNA 将病毒基因组RNA 包装到病毒颗粒的核衣壳中,在病毒复制和细胞感染过程中发挥重要作用[6]。
1 猪群腹泻概况
2021 年2 月,云南省曲靖市某种猪场 47 头母猪生产的564 头仔猪出现呕吐、黄色水样腹泻、脱水等临床症状,其中10 日龄仔猪死亡367 头,病死率为65.01%。死亡仔猪剖检变化主要为皮下干燥,胃内有黄白色凝乳块,小肠严重扩张,肠壁内充满气体,并伴有黄色液体,肠系膜充血,肠系膜淋巴结水肿。经临床初步诊断怀疑为PEDV 感染。
2 材料与方法
2.1 病料采集处理
采集3~5 头病死仔猪肠道、肠系膜淋巴结、脾脏等组织病料,混合剪碎研磨,按照体积比1:10加入PBS,反复冻融3 次后,3 000 r/min 离心10 min,取上清液提取核酸。
2.2 核酸提取
按照RNA/DNA 核酸提取试剂盒说明书,提取组织上清液核酸。……
