董仙兰，王 琼，韩佃刚，董 俊，杨云庆，祝 贺，叶玲玲，张 冲，尹尚莲，李瑶瑶，何昌霖，罗倩敏，艾 军

（1.云南农业大学动物医学院，云南昆明 650201；2.中国科学院昆明动物研究所，云南昆明 650223；3.昆明海关技术中心，云南昆明 650200）

流行性出血病（epizootic haemorrhagic disease，EHD）是由呼肠孤病毒科（Reoviridae）环状病毒属（Orbivirus）的流行性出血病病毒（epizootic haemorrhagic disease virus，EHDV）引起的，以侵害反刍动物为主的一类虫媒性传染病[1]。EHDV 通过库蠓（Culicoides）吸血性叮咬传播[2]，可感染包括鹿、牛、羊在内的多种反刍动物[3]，严重影响畜牧业发展及国际贸易。

EHD 呈世界分布，广泛分布于美洲、非洲、大洋洲以及亚洲的热带与亚热带地区[4]。我国的云南、贵州、四川、广东和河北等多个省份均有EHD 流行[5-6]。目前在世界范围已有9 种血清型的EHDV（EHDV-1、2、4、5、6、7、8、9、10）被发现。不同血清型病毒间缺乏交叉免疫保护，致病性也存在较大差异，因而给EHD 防控带来极大挑战[7]。我国主要流行5 种血清型EHDV（EHDV-1、5、6、7、8）[8-9]，不同血清型EHDV 毒株之间的核酸序列差异可达56.2%，同一种血清型不同地域分离毒株的Seg-2 核酸序列差异也可达29.4%[10-11]，表明流行于我国的EHDV具有高度的血清型多样性，这给我国牛羊养殖业健康发展构成严重威胁。

目前国内外EHDV 检测方法主要分为病原检测和抗体检测，其中病原检测包括病毒分离鉴定、RT-PCR、荧光定量RT-PCR、逆转录重组酶聚合酶扩增（RT-RPA）以及特异性可视化RT-LAMP 现场检测等[12]，抗体检测包括竞争ELISA（C-ELISA）、血清中和试验、补体结合试验、琼脂凝胶免疫扩散试验等。而EHDV 检测国内尚未见ELISA 商品化试剂盒。本研究在BHK-21 细胞上增殖EHDV，灭活浓缩后，以制备的鼠源性EHDV 单克隆抗体为阻断抗体，建立了一种EHDV 阻断ELISA 抗体检测方法，并优化反应条件，试制了EHDV 阻断ELISA 抗体检测试剂盒，以期为我国EHD 防控提供技术支持。……