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应用液态悬浮芯片技术建立17 种大肠杆菌耐药基因多重快速检测方法

2021-10-10韩天飞赵建梅张青青张喜悦刘俊辉李月华黄秀梅王君玮曲志娜祁克宗

中国动物检疫 2021年10期
关键词:耐药检测

韩天飞,赵建梅,刘 娜,张青青,王 娟,张喜悦,刘俊辉,李月华,黄秀梅,王君玮,曲志娜,祁克宗

(1.中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛 266032;2.安徽农业大学兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室,安徽合肥 230036)

在人医学和兽医学中,抗菌药耐药性关系着全球健康问题[1-3]。当前耐药形势不容乐观,细菌对各类抗菌药均有不同程度的耐药,且耐药基因种类繁多、分布广泛,涉及的动物物种范围较广,包含家禽[4]、大型牲畜[5]以及伴侣动物,其中养殖场中的猪源[6]和禽源[7]菌株耐药基因检出率较高。流行率和检测率较高的耐药基因多数能在质粒、整合子、转座子等移动元件上被检出,并以水平传播方式扩散。当前,PCR 检测方法仍然是耐药基因检测的主要方法,但因耗时长、通量低、灵敏度弱而阻碍了耐药基因检测工作。

液态芯片平台具有灵活的开放式体系结构设计,可以快速、经济高效且准确执行各种测定[8]。作为一个开放式架构平台,研究人员可根据检测的目标基因设计用于杂交的探针,利用多重PCR 对目的片段进行扩增,同时在反应体系中被扩增的目的片段会被标记上对应的报告荧光,且对应的探针标记靶向DNA,使其与包被在微球上的互补捕获探针直接杂交[8-9]。

随着细菌耐药状况的不断加剧,已有多项研究证明液态芯片技术可用于多重耐药菌的检测。李婧婵[8]使用液态芯片技术检测多重耐药结核分枝杆菌,发现最低检测浓度可达1 ng/mL;孙青菊等[9]建……

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