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玉米内州萎蔫病菌荧光重组酶介导等温扩增检测方法的建立

2021-10-09单长林季文彬李孝军

浙江农业学报 2021年9期
关键词:检测

单长林,周 圆,任 琰,季文彬,李孝军

(1.舟山海关综合技术服务中心,浙江 舟山 316021; 2.杭州海关技术中心,浙江 杭州 310000)

由密执安棒形杆菌内布拉斯加亚种(Clavibactermichiganensissubsp.nebraskensis,Cmn)引起的玉米内州萎蔫病,可导致玉米产量损失高达44%[1],是玉米病害中重要的细菌性病害,也是我国重点关注的检疫性病害之一。该病害首先在美国内布拉斯加州中部发现[2],后逐步扩展至美国多州和加拿大部分地区[3-10],我国尚未见报道。Cmn主要通过种子传带进行远距离传播[11-12],且可寄生在稗属、狗尾草属、高粱属等多种植物上[13]。利用GRAP模型预测分析,结果显示,该病原物在我国大部分玉米种植区均适合定殖[14]。我国玉米产量连续多年稳定在2亿t以上,随着国内工业消费需求及饲料消费需求激增,每年仍需大量进口玉米填补国内产需缺口[15]。随着玉米进口贸易发展,Cmn传入我国风险剧增,一旦入侵,将严重威胁我国玉米生产,影响我国粮食生产安全。因此,建立并掌握一种简便、准确、快速的检测方法对于有效监控Cmn至关重要。

目前,针对Cmn的检测主要集中在传统分离培养、酶联免疫检测及常规分子生物学检测上[16-23]。分离培养及酶联免疫检测耗时较长、操作复杂且灵敏性较低,难以满足现场快速检测要求;以聚合酶链式反应为基础发展起来的分子生物学检测方法,包括普通PCR、巢氏PCR、实时荧光PCR方法等,均须经过变性—退火—延伸等严格控制温度变化过程,需要特定仪器支持且反应过程耗时较长,不利于现场实验室的快速检测;……

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