王 文， 王 亮， 陶 佳， 李 刚， 贾 伟

当前革兰阴性杆菌的耐药性日趋严重，尤其是多重耐药和泛耐药菌株的出现已成为全球关注的焦点。氨基糖苷类抗菌药物因其抗菌谱广、抗菌活性强，被用于抗耐药革兰阴性菌感染的临床治疗，尤其是肠杆菌科细菌所致的感染，已经成为联合用药的重要选择之一[1]。但16S rRNA甲基化酶的出现和扩散，导致了细菌对氨基糖苷类抗菌药物高水平耐药，影响了其临床抗感染治疗。本研究对宁夏医科大学总医院2017年分离的氨基糖苷类耐药肠杆菌科细菌的16S rRNA甲基化酶基因进行筛查，并对耐药情况进行研究。

1 材料与方法

1.1 菌株来源

收集我院2017年1月1日—12月31日临床诊断为各种包括呼吸道、腹腔、尿路、血流和皮肤软组织等感染分离的非重复肠杆菌科细菌142株，其中包含对阿米卡星耐药的肠杆菌科细菌72株（大肠埃希菌37株、肺炎克雷伯菌35株），对阿米卡星敏感的肠杆菌科细菌70株（大肠埃希菌32株、肺炎克雷伯菌38株），称为氨基糖苷类耐药/敏感肠杆菌科细菌。质控菌株为大肠埃希菌ATCC 25922，铜绿假单胞菌ATCC 27853，购自上海汉尼生物技术有限公司。

1.2 仪器和试剂

采用法国生物梅里埃全自动细菌分析仪VITEK 2-Compact对细菌进行鉴定，仪器配套药敏卡GN04初筛阿米卡星耐药（MIC≥64 mg/L），肉汤微量稀释法进行药敏复核，按照2017年美国临床和实验室标准化协会（CLSI）标准判断结果。

1.3 基因扩增和测序

将142株细菌分纯培养后，用煮沸法提取细菌DNA[2]。取1 μL提取物做模板，对16S rRNA甲基化酶基因（armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、rmtE、rmtF、rmtG、rmtH、npmA） 进 行 PCR扩增，将阳性扩增产物送上海生工生物工程有限公司进行测序，所得序列用BLAST软件（https:www.ncbi.nlm.nih.gov/）分别进行比对。……