白云飞，崔晓波，王博谦，王亚平，杨莉娜，刘佳荣，覃 洁

喉癌起源于喉黏膜上皮，是头颈部主要恶性肿瘤，占所有恶性肿瘤的1%～5%[1]，且病死率高[2]。目前，喉癌治疗方法以外科手术、放疗、化疗或联合治疗为主，但通常会发生较严重的不良反应，严重影响新患者的治疗和预后[3]。因此，迫切需要研发新的有效治疗药物。固本抑瘤Ⅱ号(GYⅡ)是由多名著名中医在经方基础上结合临床实践经验研制的具有益气、活血、解毒作用的综合方剂。多项临床试验已证实，GYⅡ具有良好的抗肿瘤作用，可有效缓解化疗的毒副作用，减轻化疗引起的气虚血瘀证状[4-5]。但目前尚无GYⅡ在喉癌中应用的报道。近年来ERK和Akt信号通路已被确定为肿瘤治疗的潜在靶点，最新研究表明，在小鼠乳腺癌模型中，GYⅡ可通过抑制ERK和Akt信号通路激活，抑制肿瘤的生长和转移[6-7]。因此，本研究构建Hep-2荷瘤小鼠，探究GYⅡ的抗肿瘤作用，以及其是否通过作用于ERK和Akt信号通路而发挥生物学功能的。

1 材料与方法

1.1实验动物 6周龄雌性裸鼠，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，实验动物许可证号：SCXK(京)2016-0006。在22℃、湿度55%、12 h/12 h明暗光照循环条件下饲养。

1.2主要试剂

1.2.1GYⅡ制备方法：GYⅡ由北京中医院提供，由党参、茯苓、苍术、黄芪、川芎、白术等13味中药组成，按照《中国药典(2010)》规程和《药品生产质量管理规范》生产，经石油醚脱脂，水提醇沉和去蛋白程序获得。临用前，用0.9%氯化钠注射液溶解至0.05和0.10 mg/ml[8]。

1.2.2检测试剂：RPMI 1640培养液、胎牛血清(FBS)和双抗购自Gibco公司；Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒购自上海锐赛生物技术有限公司；……