侍 方，倪 磊

在人类所有慢性代谢性骨病中，骨质疏松症最为常见，现约有2亿患者[1]，其与生理性或病理性雌激素降低密切相关。骨质疏松症在绝经后妇女中发生率显著升高，称为绝经后骨质疏松症(PMOP)[2]。PMOP发病涉及系统性炎症激活[3]。粉防己碱(TET)是从粉防己根部提取的活性物质，在抗炎、抗肿瘤、促自噬和凋亡方面发挥作用[4-5]。研究表明，肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因存在多个多态性位点，与PMOP发生密切相关[6]。在去势骨质疏松症小鼠中，TNF-α水平与骨丢失、成骨细胞和骨细胞死亡呈正相关[7]。此外，研究发现NF-κB信号通路也参与了PMOP的进程，草乌甲素可降低NF-κB信号通路活性、抑制破骨细胞生成从而达到促进成骨细胞生成的效果[8]。最新研究发现，在去势骨质疏松症兔模型中，TET通过减少TNF-α的产生抑制NF-κB信号通路激活，降低p65磷酸化水平，进而发挥治疗骨质疏松症的作用[9]。但在骨质疏松症发生过程中，TET通过何种机制作用于TNF-α及NF-κB信号通路，以及这2个信号通路间的相互关系尚不清楚。因此，本研究构建去势骨质疏松症兔模型对此问题进行解析,为TET治疗骨质疏松症提供更深层次的理论基础。

1 材料与方法

1.1实验动物 新西兰兔，雌性，20周龄，体质量3.0～3.5 kg，购自北京实验动物研究中心。实验动物许可证号：SYXK(京)2020-0038。

1.2主要试剂与仪器

1.2.1试剂：TET(美国Sigma公司)，MinuteTM骨组织总蛋白提取试剂盒[中国西宝生物科技(上海)有限公司]，兔TNF-α ELISA试剂盒(美国R&D公司)，BCA蛋白定量试剂盒(美国ThermoFisher公司)，抗兔β-actin、p85、p-p85、Akt、p-Akt、p65、p-p65、IκBαp-IκBα抗体(美国CST公司)，Anti-Rabbit IgG (美国Abcam公司)，化学发光底物(美国ThermoFisher公司)。……