兰玉菲 孔 怡* 于清伟 马为勇 崔 晓

（1泰安市农业科学院，山东泰安271000；2泰安市宁阳县华丰镇农技站，山东泰安271413）

灵芝属Ganoderma真菌是重要的药用真菌，隶属于真菌界（Fungi），担子菌门（Basidiomycota），伞菌亚门（Agaricomycetes），多孔菌目（Polyporales），多孔菌科（Polyporaceae），在我国已有悠久的应用历史[1]。

近年来山东省灵芝生产发展迅速，种质资源也在不断丰富，但目前对灵芝属种质资源的遗传背景和遗传多样性缺少系统研究。因此，笔者对山东省栽培灵芝菌株的遗传多样性进行研究，明确了27个栽培灵芝属菌株的分类地位，为灵芝属种质资源保护、遗传改良和新品种选育提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 供试灵芝菌株

供试的27个灵芝菌株中ZL81来自四川中医药科学院，紫芝、园芝1号来自寿光食用菌研究所，其他24个菌株均来自泰安市农业科学院。具体编号见表1。

表1 试验灵芝属菌株及编号

1.2 主要试剂与仪器

真菌总DNA提取试剂盒（E.Z.N.A.®Fungal DNA Kit）、2×EasyTaq PCR SuperMix等购自北京全式金生物技术有限公司；常规试剂为进口分装或国产分析纯。My Cycle PCR仪，美国伯乐仪器公司。

1.3 供试培养基

PDA加富培养基：配方参照文献[2]。

1.4 菌丝体制备

切取保存在PDA加富斜面培养基上的菌丝纯培养5 mm2，接种于PDA加富平板培养基中央，25℃暗培养5～7 d，待菌丝接近生长至平板边缘后，刮取菌丝体用于基因组DNA的提取。

1.5 DNA的提取

利用DNA提取试剂盒提取真菌总DNA。具体步骤参照文献[3]。提取的总DNA于-20℃保存备用。

1.6 ITS扩增

参照文献[4]用于真菌ITS区域扩增的通用引物ITS1/ITS4进行PCR扩增。PCR反应体系和PCR反应程序参照文献[3]。

表2 PCR扩增ITS所用引物的核苷酸序列