李浩霞 尹跃 杨斌 安巍 赵建华

摘要：以宁夏枸杞（Lycium barbarum L.）'宁杞1号'果实为材料，利用RT-PCR技术，克隆出LbPME的全长序列为1 152 bp，包含完整的开放阅读框（ORF），编码有384个氨基酸，蛋白质分子量为42.63 ku，理论等电点9.20;LbPME编码的蛋白包含2个可能的N-糖基化结合位点（Asn46和Asn183），4个底物结合位点（Thr166、Gln201、Arg301和Trp303）和2个酶活性位点（Asp224和Asp245）。分析发现，该蛋白由多个呈右手螺旋的β折叠肽链组成，且含有1个中空三角柱状的PME经典结构;LbPME与茄科的烟草的同源性达到90.86%。利用实时荧光定量技术，发现不同组织中LbPME均有表达，且在茎中最高而叶中最低，两者存在显著差异;随着果实的发育，LbPME表达量呈现出先升后降趋势，在青果期表达量最高，随后显著降低，在成熟期维持较低水平。本研究结果为进一步探讨枸杞LbPME的功能奠定了基础。

关键词：枸杞;果胶酯酶基因;克隆;表达

中图分类号： S188  文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2021）18-0033-06

收稿日期：2021-01-05

基金项目：国家自然科学基金（编号：32060359）;宁夏自治区科技创新领军人才项目（编号：KJT2017004）;宁夏自治区农业科技自主创新专项（编号：NKYJ-18-16）。

作者简介：李浩霞（1977―），女，甘肃景泰人，副研究员，主要从事旱作农业及栽培生理研究。E-mail：lihaoxia0943@163.com。

通信作者：赵建华，博士，副研究员，主要从事枸杞种质遗传改良与分子生物学研究。E-mail：zhaojianhua0943@163.com。

果胶酯酶又称果胶甲酯酶（pectin methylesterase，简称PME），是细胞壁代谢的关键酶之一，PME催化果胶分子去甲酯化后易与钙离子结合，使细胞壁硬化，延缓细胞的生长;同时，PME在去甲酯化过程中，释放大量氢离子，形成低pH值的胞外环境，聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶活性增强，造成果胶大量降解，促进细胞加快生长[1-2]。……