王洪瑾　冯艳萍　张科伟　武圳　李毅

[摘要]目的：研究紅景天苷对高原冻伤大鼠血管内皮细胞释放舒缩因子的影响。方法：随机选取健康雄性SD大鼠90只，按照随机数字表法分为3组，模拟冻伤组30只，冻伤组30只，红景天苷组30只。红景天苷组定期给予腹腔注射红景天苷20mg/kg，模拟冻伤组和冻伤组定期给予等体积生理盐水注射，从冻伤当日开始，各组均每日注射1次，直到取材截止。冻伤后第1天、第3天、第7天观察各组创面情况，并进行腹主动脉采血，测定血浆中一氧化氮（NO）、血浆内皮素（ET）、血栓素B2（TXB2）、6-酮-前列腺素F1α（6-K-PGF1α）水平。结果：伤后第7天冻区创面情况观察，冻伤组足部组织肿胀明显，各趾远端出现干瘪，近端和远端呈黑色干性坏死，部分坏死组织脱落，无渗出，红景天苷组冻区足部组织和各趾近端肿胀明显，仅远端部分呈黑色干性坏死，无坏死组织脱落，渗出量少。与模拟冻伤组比较，冻伤组NO水平呈先降低后升高再降低的变化，且在伤后第3天最高，第7天时各组比较差异无统计学意义（P>0.05）;与冻伤组比较，红景天苷组NO水平在第1天、第3天显著升高，差异具有统计学意义（P<0.05）。与模拟冻伤组比较，冻伤组ET水平都先降低后升高的变化，差异具有统计学意义（P<0.05）;与冻伤组比较，红景天苷组ET水平在各时间点均较冻伤组低，差异具有统计学意义（P<0.05）。与冻伤组比较，红景天苷组NO/ET在第1天、第3天差异具有统计学意义（P<0.05）。与模拟冻伤组比较，冻伤组6-K-PGF1α水平呈先升高后降低再升高的变化，差异均有统计学意义（P<0.05）;与冻伤组比较，红景天苷组6-K-PGF1α水平在各时间点显著升高，差异具有统计学意义（P<0.05）。与模拟冻伤组比较，冻伤组TXB2水平呈先升高后降低的变化，差异具有统计学意义（P<0.05）;与冻伤组比较，红景天苷组TXB2水平在各时相点均低于冻伤组，差异具有统计学意义（P<0.05）。与冻伤组比较，红景天苷组6-K-PGF1α/TXB2的比值在各时间点均高于冻伤组，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：红景天苷对冻区组织具有保护作用，与调节高原地区冻伤大鼠血液中NO/ET以及6-K-PGF1α/TXB2之间的平衡有关，为红景天苷应用于冻伤治疗提供了实验数据。

[关键词]红景天苷;高原地区;冻伤;NO/ET;6-K-PGF1α/TXB2

[中图分类号]R645    [文献标志码]A    [文章编号]1008-6455（2021）08-0099-04

Effect of Salidroside on the Release of Vasomotor Factor from Vascular Endothelial Cells of Rats with Frostbite at High Altitude

WANG Hong-jin，FENG Yan-ping，ZHANG Ke-wei，WU Zhen，LI Yi

（Department of Burns and Plastic Surgery，Qinghai University Affiliated Hospital，Xining 810001，Qinghai，China）

Abstract： Objective  To study the effect of salidroside on the release of cytokines by vascular endothelial cells in rats with frostbite at high altitude. Methods  Randomly selected 90 healthy male SD rats， divided into 3 groups according to the random numerical esqueer， 30 rats in the simulated frostbite group， 30 rats in the frostbite group， 30 rats in the salidroside group. The salidroside group regularly gave abdominal injection of salidroside 20mg/kg， the simulated frostbite group and the frostbite group regularly gave the same volume of physiological saline injection， from the date of frostbite， each group was injected once a day until the end of the material. On the 1st， 3rd and 7th days after frostbite， the groups were observed and blood was collected from the abdominal aorta to determine the levels of NO， ET， TXB2， 6-K-PGF1α in the plasma. Results  After the injury 7d frozen area of the wound surface observation， the frostbite group foot tissue swelling was obvious， the far end of each toe appears dry， near and far end of the black dry necrotasia， part of the necrotic tissue off， no seepage， the salidroside group frozen area foot tissue and the near end of the toe swelling obvious， only the far end of the black dry necrotasia， non-necrotic tissue shedding， oozing less. Compared with the simulated frostbite group， the NO level in the frostbite group showed a change of first decreasing， then increasing and then decreasing， and it was the highest at 3d after injury， and there was no statistically significant difference between each group at 7d （P>0.05）. Compared with the frostbite group， NO levels in the salidroside group were significantly increased on 1d and 3d， the differences were statistically significant （P<0.05）. Compared with the simulated frostbite group， ET levels in the frostbite group decreased first and then increased （P<0.05）. Compared with the frostbite group， ET level in the salidroside group was lower at each phase point than that in the frostbite group （P<0.05）. Compared with the frostbite group， the differences of NO/ET in the salidroside group on 1d and 3d were statistically significant （P<0.05）. Compared with the simulated frostbite group， the 6-K-PGF1α level in the frostbite group increased first， then decreased and then increased （P<0.05）. Compared with the frostbite group， the level of 6-K-PGF1α in the salidroside group was significantly increased at each phase point （P<0.05）. Compared with the simulated frostbite group， TXB2 level in the frostbite group increased first and then decreased （P<0.05）. Compared with the frostbite group， TXB2 level of the salidroside group was lower than that of the frostbite group at all time points （P<0.05）. Compared with the frostbite group， the ratio of 6-K-PGF1α/TXB2 in the salidroside group was higher than that in the frostbite group at each phase point （P<0.05）. Conclusion  Salidroside has a protective effect on frozen tissue， and is related to regulating the balance between NO/ET and 6-K-PGF1α/TXB2 in the blood of frostbite rats in the plateau area， providing experimental data for the application of salidroside  to treat frostbite.

Key words： salidroside; plateau area; frostbite; NO/ET; 6-K-PGF1α/TXB2

青藏高原特殊的地理环境和地貌特征造成了高原地区低气压、低温、低氧、干燥、大风、强日照辐射的环境特征，常有冻伤发生。冻伤患者由于冷冻因素的物理作用及冻融病理过程所引起的一系列生化改变，对血管内皮细胞及凝血系统的功能受到影响[1-3]。红景天系景天科红景天属植物，在青海分布广，蕴藏量大，是青海省常用藏药。目前红景天苷在凍伤领域的相关研究鲜有报道，本实验进行红景天苷对高原地区冻伤大鼠内皮细胞释放舒缩因子的影响。

1  材料和方法

1.1 实验动物：清洁级健康雄性成年SD大鼠90只（大鼠品系为SD大鼠），购自西安科奥生物科技有限公司，动物生产许可证：SCXK（陕）2018-001，体重（300±20）g，在恒温（24±2）℃，恒湿（50±5）%条件下饲养两周后送至泽库县（平均海拔3 500m）的实验点（海拔3 600m）适应性饲养两周，实验前24h禁食，4h禁饮。本研究经过青海大学附属医院动物伦理委员会审批（AF-RHEC-0018-01）。

1.2 主要材料：Tecan Infinite F200/M200型多功能酶标仪、红景天苷、水合氯醛（索莱宝公司）、DC-2006低温恒温槽、低速自动平衡离心机（北京医用离心机厂），NO、ET、TXB2、6-K-PGF1α酶联免疫分析试剂盒（武汉伊莱瑞特生物科技有限公司）。

1.3 大鼠冻伤模型的构建：将大鼠在海拔3 600m处实验场地适应性饲养两周后，按随机数字法随机分组，用浓度为10%水合氯醛腹4ml/kg腔注射麻醉，起效后大鼠双后肢给予脱毛处理形成裸露皮肤。将大鼠后肢浸入800ml水和400ml无水乙醇混合的-20℃的低温恒温槽内，冷冻30s后取出，为Ⅲ度冻伤[1]，冻伤面积20%，冻伤大鼠造模完成[4]。Ⅲ度冻伤大鼠共60只，其中30只为冻伤组（腹腔注射生理盐水），30只为红景天苷组（腹腔注射红景天苷）。30只大鼠双下肢放入35℃生理盐水中，浸泡30s后取出，为模拟冻伤组。冻伤大鼠分每笼5只饲养，避免互相撕咬造成损伤。实验过程中麻醉阶段存在大鼠死亡情况，死亡2只，及时进行补充，后续给药无死亡情况。

1.4 药液的制备与给予：红景天苷组腹腔注射红景天苷剂量20mg/kg，于冻伤后2h注射一次，以后每日14：00注射一次，直到取材截止。模拟冻伤组和冻伤组大鼠腹腔注射等体积0.9%氯化钠注射液，每日14：00注射一次，直到取材截止。

1.5 冻区创面情况观察：各组在冻伤后第1天、第3天、第7天观察冻区创面情况：渗出、水肿、结痂、坏死等。

1.6 NO、ET、TXB2、6-K-PGF1α水平测定：各组在冻伤后第1天、第3天、第7天取腹主动脉采血，血液标本室温下静置1h，3 000rmp，离心10min，每个时间点每组取10只。血液经离心取血清，分别按照一氧化氮（NO）、血浆内皮素（ET）、血栓素B2（TXB2）、6-酮-前列腺素F1α（6-K-PGF1α）酶联免疫分析试剂盒说明书操作，测定血清中NO、ET、TXB2、6-K-PGF1α水平。

1.7 统计学分析：采用SPSS 20.0软件进行数据处理。计量数据采用均数±标准差（x?±s）表示，血浆中各因子数据比较采用单因素方差分析，P<0.05为差异具有统计学意义。

2  结果

2.1 冻区创面情况观察：伤后第1天、第3天、第7天模拟冻伤组冻区无红肿，无渗出，无坏死;伤后第1天冻伤组与红景天苷组冻区脚掌组织肿胀明显，各趾远端肿胀不明显，无渗出;伤后第3天冻伤组脚掌组织肿胀明显，各趾远端肿胀不明显，有少量渗出，红景天苷组冻区足部组织和各趾远端肿胀明显，渗出量较多;伤后第7天冻伤组足部组织肿胀明显，各趾远端出现干瘪，近端和远端呈黑色干性坏死，部分坏死组织脱落，无渗出，红景天苷组冻区脚掌组织和各趾近端肿胀明显，仅远端部分呈黑色干性坏死，无坏死组织脱落，渗出量少。见图1。

2.2 NO、ET水平测定：与模拟冻伤组比较，冻伤组与红景天苷组的NO水平呈先降低后升高再降低的变化，且在伤后第3天最高，第7天时各组比较差异无统计学意义（P>0.05）。与冻伤组比较，红景天苷组NO水平在第1天、第3天显著升高，差异具有统计学意义（P<0.05），且第3天红景天苷组NO水平最高。见表1。

与模拟冻伤组比较，冻伤组与红景天苷组的ET水平都呈先降低后升高的变化，同时各时间点组间比较差异有统计学意义（P<0.05），且在第7天最高。与冻伤组比较，红景天苷组ET水平在各时间点均较冻伤组低，差异具有统计学意义（P<0.05）。见表2。

与模拟冻伤组比较，冻伤组与红景天苷组的NO/ET比值呈先升高再降低的变化，且第3天最高，第7天时组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。与冻伤组比较，红景天苷组NO/ET在第1天、第3天差异具有统计学意义（P<0.05），且第3天红景天苷组NO/ET比值最大。见表3。

2.3 6-K-PGF1α、TXB2水平测定：与模拟冻伤组比较，冻伤组与红景天苷组的6-K-PGF1α水平呈先升高后降低再升高的变化，差异均有统计学意义（P<0.05）。与冻伤组比较，红景天苷组6-K-PGF1α水平在各时间点显著升高，差异具有统计学意义（P<0.05）。见表4。

与模拟冻伤组比较，冻伤组与红景天苷组的TXB2水平都呈先升高后降低的变化，同时各时间点组间比较统计学有统计学意义（P<0.05）。与冻伤组比较，红景天苷组TXB2水平在各时间点均低于冻伤组，差异具有统计学意义（P<0.05）。见表5。

冻伤组的6-K-PGF1α/TXB2比值在各时间点均低于模拟冻伤组，差异具有统计学意义（P<0.05）。与冻伤组比较，红景天苷组6-K-PGF1α/TXB2的比值在各时间点均高于冻伤组，差异具有统计学意义（P<0.05）。见表6。

3  讨论

冻伤导致内皮细胞功能改变而使凝血系统功能改变，血栓形成，血管痉挛或狭窄，促使冻伤组织发生血液循环障碍，而这些改变最终造成组织破坏和细胞坏死。临床上冻伤部位集中在肢体暴露部分，病情严重，情况特殊[5]。高海拔造成的冻伤具有低氧和低温双重打击，治疗较平原地区难度更大[1]。笔者单位收治的高原冻伤患者致残率高，住院周期长，是临床治疗的难点。

血管内皮细胞可分泌多种血管舒缩因子以调节血管正常的舒缩状态，从而维持基础张力的稳定。NO是内源性血管舒张因子的主要活性成分，ET是目前认为收缩血管最强的因子，当血管内皮细胞释放NO减少时，又可进一步促进内皮细胞合成释放ET增加，从而导致NO/ET比例失调，导致血管收缩功能障碍。TXB2、6-K-PGF1α是调节血管舒缩的重要因子，两者比例失衡被认为是导致机体高凝状态形成关键原因。NO/ET、6-K-PGF1α/TXB2间的平衡被打破从而导致血栓形成和血管痉挛的发生[6-7]。

红景天苷是红景天的主要药效成分，能促进动物体脂动员和促进胆固醇代谢，有效抑制二磷酸腺苷诱导的血小板聚集和抗体外血栓形成，红景天苷还可通过扩张阻力血管和容量血管，使动脉血压和左室舒张末压下降，降低心脏的前后负荷，对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用，同时，明显降低心肌耗氧量，拮抗心律失常，这些对心血管有利的药理作用使得红景天有望成为抗心肌缺血的新药之一。服用红景天后偶有患者会出现过敏、胃肠道不适、头痛以及恶心等，这些副作用一般都是比较温和的，减量之后都能恢复正常[8-10]。

本研究显示，红景天苷组冻区组织存活较冻伤组多，表明红景天苷对冻伤具有比较好的治疗效果。冻伤组血清NO和ET水平与模拟冻伤组比较都呈现出先降低再升高，可能与冻伤后血管内皮细胞代谢下降，导致NO和ET水平下降相关。红景天苷组NO水平在第1天、第3天均高于冻伤组，提示红景天苷可以通过增加冻伤大鼠血液中NO水平扩张血管;与冻伤组比较，红景天组ET水平在各时相点均较冻伤组低，提示红景天苷可以降低冻伤大鼠血液中ET水平减轻血管收缩程度。进一步分析NO/ET比值，红景天苷组在第1天、第3天均大于冻伤组，证明红景天苷可以通过调节NO/ET比值减轻冻伤大鼠血管收缩程度。与模拟冻伤组比较，冻伤组6-K-PGF1α呈先升高后降低再升高的变化，提示冻伤大鼠扩张因素受到了影响。与冻伤组比较，红景天苷组6-K-PGF1α水平在各时相点均升高，提示红景天苷通过提高6-K-PGF1α水平促进冻伤冻伤血管扩张。冻伤组的TXB2水平呈先升高后降低的变化，提示冻伤后TXB2水平促血管收缩作用增强。红景天苷组TXB2水平在各时相点均低于冻伤组，提示红景天苷降低了冻伤大鼠血管收缩的因素。与冻伤组比较，红景天苷组6-K-PGF1α/TXB2的比值在各时间点均高于冻伤组，再次证明了红景天苷具有扩张冻伤大鼠血管的作用。综上，红景天苷扩张冻伤大鼠血管的作用效果是显著的，对改善冻区组织血供有重要意义，从而起到减轻冻伤组织损伤的作用。

本次研究发现红景天苷可以减轻高原地區冻伤大鼠冻伤组织损伤的作用，与其调节血液中的NO、ET、TXB2和6-K-PGF1α水平，进而调控NO/ET、6-K-PGF1α/TXB2间的平衡影响血管的舒缩有关。为红景天苷治疗高原地区冻伤提供了实验依据，但其具体的机制仍需要进一步研究。

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[收稿日期]2020-10-23

本文引用格式：王洪瑾，冯艳萍，张科伟，等.红景天苷对高原冻伤大鼠血管内皮细胞释放舒缩因子的影响研究[J].中国美容医学，2021，30（8）：99-102.