靳倩，魏瑞娜

郑州市第三人民医院，河南 郑州 450000

阿尔茨海默病（alzheimer disease，AD）是临床常 见的慢性进行性中枢神经系统退行性疾病，主要表现为神经元内出现神经原纤维缠结和形成以β-淀粉样蛋白（beta-amyloid protein，Aβ）为主的老年斑（seruleplaque，SP）［1-2］。研究证实，Aβ能导致神经细胞凋亡，具有毒性，是发生AD的关键因素［3］。黄芪提取物从黄芪中提取的有效成分，具有抗感染、抗氧化、免疫调节、保护神经细胞等作用，但黄芪提取物对Aβ25-35诱导的海马神经元损伤保护及其机制研究较少［4］。基于此，本研究采用体外培养海马神经细胞，旨在探讨黄芪提取物对海马神经元损伤的保护作用及机制。

1 材料

1.1动物SD胎鼠21只，雌性，月龄为11～14月，已孕17～18 d，体质量（360～400）g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，动物许可证号：SCXK（泸）2012-0002，饲养于25～27℃，相对湿度52%～55%，自由摄食和进水，光照与黑暗时间为1∶1健康状况良好。伦理批号：2020074。

1.2药物与试剂黄芪提取物（由黄芪总苷及黄芪多糖按一定比例组成，由合肥市恒星药物研究所提供，批号：20021018）；Aβ25-35（美国Sigma公司，批号：2019030）；40 ng·L-1多聚甲醛（北京雷根生物技术有限公司，批号：20190305）；无钙镁D-Hanks液（美国Gibco公司，批号：20190903）。

1.3仪器CO2孵箱（美国Themo公司）；BX51型倒置相差显微镜（日本Olympus公司）；ZEISS LSM710型激光共聚焦显微镜（美国Thermo公司），取材台（广州华俊医疗器械公司），摊片烤片机（德国Leica公司）；干燥箱（中国上海跃进医疗器械厂）；病理切片机（德国Micro公司）。

2 方法

2.1细胞培养选取21只已孕的SD雌性大鼠，在无菌环境下取出孕18 d SD胎鼠，颈椎脱臼处死，分离出海马，用预冷无钙镁D-Hanks液洗涤，剪成小块，置于含有0.125%胰蛋白酶培养皿中，放37℃培养箱中培养，缓慢摇匀消化20 min，加入含10%胎牛血清停止消化，以1 000 r·min-1离心5 min，弃上清；……