董国霞 张华捷 晁哲 田霖 侯启明 谭亚军 马霄（中国食品药品检定研究院百白破疫苗和毒素室，卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室，北京102629）

破伤风疫苗是预防破伤风的有效途径，破伤风类毒素是破伤风疫苗的主要有效组分，破伤风疫苗效价检测是疫苗有效的重要指标。本研究拟通过抗破伤风类毒素单克隆抗体的制备为破伤风疫苗效价检测新方法的建立、低含量破伤风类毒素测定、吸附度测定等奠定基础，以提升我国破伤风疫苗质量控制水平。

1 材料与方法

1.1 材料破伤风类毒素由本室提供；HRP标记的羊抗鼠二抗为Invitrogen产品；石蜡油为MP Bio‐medical产品；DMEM培养液、胎牛血清为Gibco产品；G蛋白柱为GE Healthcare产品；超滤管为Milli‐pore产品；96孔聚苯乙烯酶标板为Greiner Bio-One GmbH产品；抗体亚类鉴定试剂盒为Proteintech产品；其他常用试剂均为国产分析纯；SP2/0骨髓瘤细胞由本室保存；BALB/c小鼠、昆明小鼠由中国食品药品检定研究院实验动物生产与供应室提供。3K30高速冷冻离心机为Sigma产品；5810R低速离心机为Eppendorf产品；AKTA层析系统为Amer‐sham pharmacia biotech产 品；Biacore T200为GE Healthcare产品；酶标仪为Bio-Tek产品；电泳仪为Bio-Rad产品。

1.2 方法

1.2.1 抗破伤风类毒素单克隆抗体的制备及纯化［1-2］选择纯度较好的破伤风类毒素抗原对BALB/c雌性小鼠进行免疫，按常规方法将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合，把筛选后获得的阳性杂交瘤细胞株进行扩种、保存。取BALB/c雌性小鼠，每只腹腔注射0.5 ml石蜡油，10 d后每只小鼠腹腔注射1×106个杂交瘤细胞，注射1周后收集腹水，3 000 r/min离心20 min，收集中间层，-20℃冻存。用AKTA层析系统和Protein G柱对收集的中间层进行纯化。……