孙丛萌

（梅州市妇女儿童医院，广东 梅州 514021）

0 引言

随着男性年龄的显著增长，会显著提高后代发生染色体出现缺陷的可能性。研究显示男性年龄的增长与自然流产之间也存在着密切的联系，但临床男性年龄对生育产生的影响机制还不够明确。此外，随着男性年龄的显著增长，也会提高男性精子DNA碎片率进而影响男性的生育能力[1-2]。本研究中采用精子染色质扩散法检测精液中的精子DNA碎片率，探讨精子DNA碎片率与男性年龄以及精液质量之间的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料。选取435例于2017年1月1日至2019年6月30日在梅州市妇女儿童医院辅助生殖接受夫精人工授精（AIH）的男性不育患者作为研究对象，年龄21~49岁，平均（32.32±5.54）岁，所有患者禁欲2~7 d，手淫法收集完整精液标本，37℃完全液化后待检。

1.2 方法

（1）精液质量分析：精子浓度及精子前向运动精子数（PR）采用以色列的MAKLER精子计数板手工法进行精子计数。精子形态学分析洗涤精子，将0.5 mL精液加10 mL生理盐水中稀释，800 g离心10 min，使用拉薄技术，将5~10 uL精子混悬液均匀涂在载玻片上。采用巴氏染色法进行精子形态学的分类，通过光学显微镜观察精子包括头、颈、中段、主段和末段，每张涂片至少评估200个精子。

（2）精子DNA碎片检测：精子DNA碎片检测采用深圳博锐德生物科技有限公司生产的试剂盒的检测方法，严格按照试剂说明书进行操作。

（3）按照精子DNA碎片率正常参考值（≤25%）进行对比分析：对精子DNA碎片率>25%为高度碎片化，≤25%中度碎片化，≤15%为正常进行划分；按年龄组将435例患者划分为≤30岁，>30-≤40岁及>40岁，进行相关性分析。

1.3 统计学分析。采用SPSS 20.0软件对比较数据实施统计分析，计量资料以（±s）表示，采用独立样本t检验，计数资料表示方式为[n（%）]，采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 DNA碎片率与精液质量结果对比分析。对比其精子浓度差异无统计学意义（P>0.05），PR、正常精子形态率、TZI对比差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

表1 DNA碎片率与精液质量结果对比分析（±s）

表1 DNA碎片率与精液质量结果对比分析（±s）

≤25 345 74.26±57.02 48.62±15.20 3.56±2.63 1.35±0.16>25 90 68.13±61.65 34.20±14.93 2.29±2.29 1.47±0.21 t - 0.8929 8.0442 4.1851 5.9126 P - >0.05 <0.05 <0.05 <0.05

2.2 不同年龄组精子DNA碎片率结果对比分析。>40岁年龄组患者精子碎片率显著上升，其他两个年龄组之间差异无统计学意义（P>0.05）。精子DNA碎片率与男性不育患者年龄呈正相关，见表2。

表2 不同年龄组DNA碎片率结果对比分析（±s）

表2 不同年龄组DNA碎片率结果对比分析（±s）

年龄组 ≤30岁（n=198） ＞30~≤40岁（n=192） >40岁（n=45）DNA碎片率（%） 17.45±10.52 17.61±12.70 24.70±16.25

2.3 圆细胞>1.0×106/mL精子DNA碎片与精液质量结果对比分析。圆细胞>1.0×106/mL的精子DNA碎片率明显上升（P<0.05）；两组精子浓度差异无统计学意义（P>0.05），PR、精子正常形态率、TZI显著下降，差异有统计学意义（P<0.01），见表3。

表3 圆细胞＞1.0×106/mL精子DNA碎片与精液质量结果对比分析（±s）

表3 圆细胞＞1.0×106/mL精子DNA碎片与精液质量结果对比分析（±s）

组别 例数 DNA碎片率（%） 浓度×106/mL PR（%） 正常形态率（%） TZI>1.0×106/mL 96 20.24±12.74 70.81±49.59 40.49±14.81 2.68±2.26 1.42±0.17<1.0×106/mL 339 17.71±12.21 73.61±60.21 47.1±16.32 3.47±2.68 1.36±0.17 t-1.7750 0.4172 3.5731 2.6345 3.0528 P->0.05 >0.05 <0.05 <0.05 <0.05

2.4 碎片率分组与精液质量结果对比分析。三组的精子浓度对比差异无统计学意义（P>0.05）；PR、正常形态率TZI对比差异有统计学意义（P<0.05），见表4。

表4 碎片率分组与精液质量结果对比分析

2.5 碎片率分组与精液参数的相关性分析。精子DNA碎片率与男性不育患者精子浓度差异无统计学意义（P>0.05），与前向运动精子百分率、精子正常形态率、TZI呈显著性负相关，差异有统计学意义（P<0.01），见表5。

表5 碎片率分组与精液参数的相关性

3 讨论

我国不孕不育症的发病率约12.5%，且发病率呈逐年上升，男性不育是由精子和精浆的质量决定的，精子的质量影响了受精能力，在不育症患者中，精子浓度、活力和形态的分析是评价精子质量的诊断依据，而这些精子质量的传统指标只能评价部分功能[3-4]。精子DNA碎片率被认为是一个新的评价精子质量和预测男性生育能力的指标，精子DNA碎片率程度反映精子遗传物质的完整性，精子DNA碎片增加会造成不育和反复流产[5-6]。

本研究发现随着精子DNA碎片率上升，精子浓度有下降趋向，但差异无统计学意义，PR、精子形态学、TZI呈显著性负相关。通过3个不同年龄段的精子DNA碎片率分析，>40岁年龄组精子DNA碎片率明显高于其他年龄组，可能与男性年龄增长、自由基增加造成染色质异常、睾丸生精过程DNA 修复能力降低有关。本研究认为精液圆细胞增多，可能与精子质量下降呈正相关。因此，精子DNA碎片率检测作为精液常规分析的重要补充，能够更全面地评估男性精液质量水平。

综上所述，精子DNA碎片率与男性不育患者年龄呈正相关，与精子浓度无显著性差异，与前向运动精子百分率 、精子正常形态率、TZI呈显著性负相关。精子DNA碎片率可以独立作为精子质量评价指标.也可以结合其他精子质量作为评价指标，为评估男性不育症提供更全面的实验室数据。