郑晓宇

（广西南宁市第一人民医院胸心血管外科，广西 南宁 530021）

非小细胞肺癌（NSCLC）是临床常见恶性肿瘤，具有较高的发病率及死亡率，严重危害人类身体健康及生命安全。目前，临床治疗NSCLC常采用手术、化疗、放疗等综合治疗手段，可显著提高患者生存率，但同一治疗方法针对相同病理类型及分期的患者，预后差异较大[1]。因此，需寻找新的治疗靶点，以衡量NSCLC患者预后指标，增强临床治疗效果。研究发现，脂联素（APN）与肿瘤的发生密切相关，可抑制癌细胞的转移和增殖，同时，其受体脂联素受体l（AdipoR1）和脂联素受体2（AdipoR2）在多种肿瘤组织中均有表达[2]。但关于脂联素及其受体与NSCLC的关系研究报道较少。基于此，本研究旨在探讨APN及其受体在NSCLC组织中的表达及预后评估价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取本院2013年3月至2014年10月收治的NSCLC患者40例，其中将手术切除的肺癌组织作为实验组，手术切除的癌旁正常肺组织作为对照组。其中男26例，女14例；年龄36～64岁，平均年龄（53.47±6.49）岁；临床分期：Ⅰ/Ⅱ期19例，Ⅲ/Ⅵ期21例；有吸烟史16例，有吸烟后毛细支气管炎史11例，合并肺气肿5例，有无淋巴结转移17例。本研究获得本院医学伦理委员会审核批准。

1.2 纳入及排除标准 纳入标准：经病理诊断确诊者；无严重精神系统疾病者；有认知、书写、沟通能力者；患者及家属均签署知情同意书。排除标准：心脏、肝、肾等脏器疾病者；术前接受抗肿瘤治疗，如化疗、放疗等者；不能配合检查或中途退出者。

1.3 方法 术中取手术切除肺癌组织块1 cm3，距离癌组织5 cm处选取正常肺组织块l cm3，常规10%多聚甲醛缓冲液固定，石蜡包埋备用。采用免疫组化方法检测NSCLC组织及癌旁正常肺组织中APN、AdipoR1和AdipoR2表达，将蜡块标本行4μm厚度的连续切片，常规脱蜡，并修复抗原，磷酸缓冲盐溶液（PBS）浸洗3 min，3次，将切片擦干放入盛水的湿盒内。滴加10%正常山羊血清封闭液，室温20 min，甩去多余液体，勿洗。滴加50～100μL一抗（A液：兔抗人脂联素受体多克隆抗体），置于4℃冰箱内孵育过夜；滴加二抗（B液：生物素标记的山羊抗兔IgG），37℃温箱内孵育20 min，PBS清洗3 min，3次；滴加C液，链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶溶液20 min，用PBS浸洗5 min，4次。用3，3一二氨基联苯胺（DAB）显色，苏木素轻度复染，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，经显微镜观察。选择组织完整、具有代表性的切片拍照，每张切片随机选择3个视野（光镜250倍），连续计数癌细胞100个，记录阳性细胞数，并计算百分比。阳性细胞百分比，0分：≤5%；1分：6%～25%；2分：26%～50%；3分：51%～75%；4分：＞75%。染色强度：0分：无着色；1分：浅黄色；2分：深黄色；3分：棕褐色。结果判定：最终评分=染色强度评分+阳性细胞所占百分比评分。

1.4 观察指标 ①分析APN、AdipoR1和AdipoR2在NSCLC组织与正常癌旁组织中的表达。②分析NSCLC与APN、AdipoR1、AdipoR2的相关性。

1.5 统计学方法 采用SPSS 23.0统计学软件进行数据分析，计量资料以“±s”表示，行t检验，计数资料以[n（%）]表示，行χ2检验，多因素分析采用Logistic回归方法，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NSCLC组织及癌旁正常肺组织中APN及其受体表达评分 实验组APN、AdipoR1、AdipoR2表达评分均低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 NSCLC组织及癌旁正常肺组织中APN及其受体表达评分比较（±s，分）Table 1 Comparison of APN and its receptor expression scores in NSCLC tissue and normal lung tissue adjacent to cancer(±s,scores)

表1 NSCLC组织及癌旁正常肺组织中APN及其受体表达评分比较（±s，分）Table 1 Comparison of APN and its receptor expression scores in NSCLC tissue and normal lung tissue adjacent to cancer(±s,scores)

注：APN，脂联素；AdipoR1，脂联素受体l；AdipoR2，脂联素受体2

组别对照组（n=40）实验组（n=40）t值P值APN 6.02±1.01 2.94±1.12 12.916 0.000 AdipoR1 5.39±1.07 2.41±1.40 10.696 0.000 AdipoR2 5.09±1.17 2.32±1.48 9.286 0.000

2.2 影响NSCLC的线性回归分析 线性回归分析显示，APN、AdipoR1、AdipoR2表达与NSCLC相关，见表2。

表2 影响NSCLC的线性回归分析Table 2 Linear regression analysis affecting NSCLC

3 讨论

近年来，NSCLC发病率不断升高，其病因尚不明确，常认为与吸烟、环境、电离辐射、既往肺部慢性感染等因素有关，具有侵袭性、转移性、隐匿性等特点，患者早期伴有胸部肿痛、低热、咳嗽等症状，晚期出现食欲不振、疲乏、咳血，严重危胁患者生命安全[3-4]。因此，需采取积极的治疗手段，提高患者生存质量，但肺癌的治疗除依据TNM分期外，尚需考虑其他因素影响，寻找能改善预后的治疗靶点尤为重要[5]。

本研究结果显示，实验组APN、AdipoR1、AdipoR2表达评分均低于对照组（P＜0.05）；线性回归分析显示，APN、AdipoR1、AdipoR2表达与NSCLC相关。表明APN及其受体在NSCLC组织中低表达，可用于疾病诊断、预后评估。肥胖与癌症的发生与发展有关，肥胖人群肺癌的发生率较高，脂肪组织作为能量贮存器官，也具备内分泌功能，其分泌的脂肪细胞因子具有多种生物活性[6-7]。APN是脂肪细胞特异分泌的内源性生物活性分子，具有调节糖脂代谢、改善胰岛素抵抗、抗炎、抗动脉粥样硬化及抗肿瘤的作用，与冠心病、糖尿病、高血压、肿瘤等多种疾病密切相关[8-9]。脂联素的生物学作用是在脂联素受体的介导下发生的，其受体包括AdipoR1、AdipoR2，其中AdipoR1主要表达在骨骼肌细胞，对APN的球状结构域具有高亲和力，但对全长APN亲和力低，AdipoR2主要表达在肝细胞，对球形及全长型APN有中等亲和力[10]。APN通过其受体激活环磷酸腺苷（cAMP）、蛋白激酶A（PKA）和单磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）两条通路，可阻碍肿瘤血管生成，抑制细胞增殖、迁移，并促使肿瘤细胞凋亡，发挥抗癌作用[11]。另一方面，APN可抑制巨噬细胞的吞噬活性及巨噬细胞前体的发育，减轻机体炎症反应，进而减少肿瘤的发生[12-13]。此外，APN通过直接作用于癌基因和抑癌基因，从而抑制细胞的增殖及诱导细胞的凋亡。

综上所述，APN及其受体在NSCLC组织中呈低表达，为NSCLC的早期诊断、治疗及预后评估提供参考依据。