宫磊，张志坚，杨建课，高继光，戚之琳

(1. 皖南医学院医学生物学教研室，安徽 芜湖 241002；2. 皖南医学院医学生物化学教研室，安徽 芜湖 241002)

脑腱黄瘤病(cerebrotendinous xanthomatosis，CTX)是一种常染色体隐性遗传的脂质代谢性疾病。90%以上的病例是由于CYP27A1基因突变导致编码产物固醇27-羟化酶功能异常，继而引起胆酸合成障碍而发病，临床表现为多系统损害，如青少年白内障、肌腱黄瘤、早发性动脉硬化、进行性神经功能障碍等。通过基因检测早期明确诊断并采用鹅去氧胆酸治疗对于阻止或延缓病情发展具有重要的意义[1-3]。在对CYP27A1基因的检测中，我们发现由于其编码序列GC含量较高，进行PCR扩增时，很容易出现非特异性条带，不利于后续对PCR产物的测序分析。为提高PCR反应的特异性，我们采用了热启动PCR，并在反应体系中添加了去离子甲酰胺，以优化CYP27A1基因检测的方法，同时也为高GC比DNA片段的扩增提供方法上的参考。

1 资料与方法

1.1血液标本 健康人体外周血标本1例，肝素锂抗凝，-20℃冰柜冻存。

1.2研究方法

1.2.1主要仪器和试剂 Mastercycler Gradient PCR仪(Eppendorf公司)；血液基因组DNA提取试剂盒(Axygen公司)；去离子甲酰胺(上海生工生物工程公司)；热启动Taq酶(Takara公司)；DL2000 DNA Marker(Takara公司)；dNTPs(Takara公司)；PCR清洁试剂盒(Axygen公司)。

1.2.2DNA提取 将全血室温解冻后，使用血液基因组DNA提取试剂盒提取出基因组DNA。

1.2.3引物设计和合成 NCBI网站在线设计4对引物分别扩增CYP27A1基因4个片段，涵盖CYP27A1基因全部外显子以及外显子内含子接头处。引物序列、位置以及扩增片段的编号、大小、GC含量见表1。

表1 引物序列、位置以及扩增片段的……