巩 江 贺 学 沙 莎 戎 浩 倪士峰

（1 西藏民族大学医学院，咸阳 712082；2 西北大学生科院中药系，西安 710000）

随着肿瘤生物学研究的不断进步，靶向治疗逐渐应用于恶性肿瘤的临床研究中，雷帕霉素（rapamycin，RAPA）属于大黄内酯类药物，易溶于脂肪，能够抑制mTOR信号通路活性，多应用于脏器移植及心脑血管疾病的治疗[1]。目前，大量研究表明，雷帕霉素在胃癌及肺癌临床中具有抗肿瘤作用。丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）通路主要包含3种：JNK（正c-Jun氨基末端转移酶）、P38、细胞外信号调控激酶（ERK）通路，参与多种恶性肿瘤进程。研究表明，细胞因子及细胞外的刺激因子均可调节MAPK信号通路表达，促进肿瘤转移参与血脑屏障的损伤作用[2-3]。凋亡蛋白家族中，Bax可促进凋亡，Bcl-2、Bcl-xl作用与之相反，均参与癌细胞的凋亡及增殖[4]。本研究探讨雷帕霉素介导MAPK信号通路对肝癌细胞Bcl-2、Bcl-xl及Bax蛋白表达的影响。

1 材料和方法

1.1 细胞、仪器与试剂

人肝癌细胞BEL-7402细胞（中国科学院上海细胞库）；雷帕霉素（Fermanter公司，Israel）；Bcl-2、Bcl-xl及Bax抗体（Santa Cruz公司，USA）；MAPK抗体（Abcam；USA）；流式细胞仪（常州必达科生物）。

1.2 试剂配制

MTT溶液：将MTT粉末溶于PBS缓冲液中制成5 ng/mL的溶液，低温保存。雷帕霉素：将1 mg/mL的雷帕霉素溶于DMSO中，浓度为1 000 mg/mL，低温保存。

1.3 细胞培养

将低温冷藏的BEL-7402 细胞，快速移入37℃水中溶解，离心后，离弃上清液，加入培养基，5%CO2，37.5℃保存，贴壁生长，次日更换培养基，生长到90%时，进行1∶3 传代，继续培养，取对数生长细胞进行实验。

1.4 显微镜下观察BEL-7402 细胞形态

取对数生长细胞，细胞浓度调整为5×103接种至96 孔板中，培养24 h，对照组不加入雷帕霉素干预（对……