刘光辉,杨田野,洪雅军,王 航,潘铭东,孟 春,徐朝阳

0引言

视网膜新生血管性疾病是临床常见的眼病，如糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)、早产儿视网膜病变(retinopathy of prematurity,ROP)、年龄相关性黄斑病变(age-related macular degeneration,ARMD)等，其病理过程中均涉及由视网膜微血管内皮细胞(endothelial cells，ECs)和视网膜微血管周细胞(retinal microvascular pericytes，RMPs)共同参与的血管新生(angiogenesis)。构建体外血管新生模型是探索血管新生的生理病理过程、研究新生血管性疾病重要的工具。截至目前，已有不少学者建立了体外三维血管模型[1-2]，但是大都仅以单一的血管ECs为基础，未能充分模拟ECs和RMPs相互配合的血管新生过程。本研究拟采用ECs和RMPs在内的全微血管成分细胞构建大鼠视网膜血管体外三维培养模型，以便为视网膜新生血管性疾病的机制研究提供一个有力的工具。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1实验动物3周龄健康清洁级雄性初断乳SD大鼠20只，体质量40±5g，购买自上海斯莱克实验动物有限责任公司[许可证号SCXK(沪)2007-0005]。饲养环境温度为21℃～25℃，相对湿度为50%～55%。普通颗粒饲料喂养，自由饮水，12h/12h明暗交替光照。实验动物的使用遵循国家科学技术委员会1988年颁布的《实验动物管理条例》，并经过福州大学生物科学与工程学院实验动物伦理委员会批准。

1.1.2主要试剂及仪器内皮细胞专用培养基(endothelial cell medium，ECM，美国Scien Cell公司)；DMEM培养基、胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)、青霉素-链霉素双抗(10kU/mL青霉素+10mg/mL链霉素，美国HyClone公司)；细胞示踪剂(美国Molecular Probes公司)；Ⅰ型胶原酶(美国Sigma公司)；人工基质胶Matrigel(美国BD公司)；血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A, VEGF-A)抗体(武汉爱博泰克生物)；24孔板及培养皿(美国Corning公司)；倒置荧光显微镜(日本Nikon公司)；……