宫丹丹，隋春兴，石 晨，李 月，姜晓东

(1.大连市中心医院 心内三科， 辽宁 大连 116033； 2.大连医科大学附属第二医院 重症医学科，辽宁 大连 116027)

心肌梗死(myocardial infarction，MI)是心血管疾病死亡的主要原因[1]，冠状动脉血流恢复(再灌注)和早期经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention，PCI)是目前治疗心肌梗死最有效的方法[2]。但是，心肌血流再灌注会导致心肌细胞损伤甚至死亡，主要机制是心肌细胞氧化应激和局部炎性反应增加，这种现象被称为“缺血/再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)损伤”。研究表明，miR-195能够针对性抑制血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A，VEGFA)，抑制VEGFA水平可以显著促进缺血区域的血管生成[3]。目前miR-26a对I/R所致心肌细胞凋亡的影响还未见报道。本研究探讨miR-26a基因沉默对I/R心肌功能、心肌细胞凋亡和梗死面积的影响及对Rho/RhoA信号通路蛋白表达的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物：SPF级雄性SD大鼠60只，10～12周龄，质量260 g左右[辽宁长生生物技术有限股份公司，许可证号：SCXK(辽)2020-0001，合格证号：211002300062682]。

1.1.2 试剂：miR-26a siRNA(上海吉玛制药技术有限公司)；反转录试剂盒、RNA提取试剂盒(TaKaRa公司)；引物、RT试剂盒荧光定量PCR试剂(Western Biotechnology 公司)；兔多克隆抗caspase-3抗体、鼠单克隆抗Bax抗体、兔多克隆抗RhoA抗体、鼠单克隆抗ROCK1抗体、兔多克隆抗GAPDH抗体、山羊抗兔IgG二抗和山羊抗鼠IgG二抗(Proteintech公司)。

1.2 方法

1.2.1 大鼠的分组及处理：用随机数表将大鼠随机分为对照组(n=20)、I/R组(n=20)和siRNA组(n=20)。siRNA组大鼠尾静脉注射4 mL/kg的miR-26a siRNA。7 d后建立大鼠心肌缺血/再灌注损伤(I/R)模型，每组大鼠腹腔注射50 mg/kg戊巴比妥钠麻醉，并将套管插入左颈动脉测量大鼠血压。使用双导联心电图仪(electrocardiogram，ECG)监测心率。然后在第四肋间切开胸腔，切除心包暴露心脏。……