李梦杰，鲍翠玉，李 晶，刘 涛

(1.湖北科技学院药学院，湖北 咸宁 437100；2.湖北科技学院糖尿病心脑血管病变湖北省重点实验室；3.湖州师范学院；4.湖北科技学院附属第二医院)

脂毒性损伤已经成为一个公共健康问题[1-2]，多项研究表明，如果游离脂肪酸水平较正常值显著升高，心脏组织的脂质沉积会增加[3-4]，导致心肌细胞内活性氧(reactive oxygen species，ROS)的增加[5]，这种过量的ROS可能会诱发心肌细胞凋亡和相关的心脏并发症。因此，抑制心肌细胞内ROS的升高将是保护心肌免受脂毒性损伤的可行方法。之前的一项关于游离脂肪酸诱导心肌损伤的研究表明，游离脂肪酸能够通过减弱氧化应激有效抑制心肌细胞内ROS的增加，从而防止心肌细胞出现凋亡[6]。考虑到这一点，我们拟使用某些抗氧化剂通过减轻氧化应激来抑制细胞内ROS的增加，避免脂毒性心肌损伤。基于此，本研究中我们使用棕榈酸(palmitic acid，PA)建立心肌细胞脂毒性损伤模型，检测鞣花酸(ellagic acid)对心肌细胞脂毒性损伤的影响及其机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂与仪器

H9C2心肌细胞购自上海通派生物有限公司。DMEM培养基、胎牛血清和胶原酶均购自Gibco；丙二醛(malondialdehyde，MDA)检测试剂盒及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)检测试剂盒购自Dojindo Molecular Technologies，Inc。ROS测定试剂盒由Applygen Technologies，Inc.提供。磷酸化AMPK(p-AMPK)、总AMPK、p-哺乳动物雷帕霉素复合靶点-1(p-mTORC1)、总mTORC1、p-p70核糖体蛋白S6激酶(p-p70S6K)、总p70S6K和β-actin多克隆抗体购自Cell Signaling Technology公司。MTT检测试剂盒购自Sigma-Aldrich公司。PA、鞣花酸及其他试剂均购自Sigma-Aldrich公司。

1.2 方法

1.2.1 MTT检测细胞增殖

用2.25g/L葡萄糖、10%胎牛血清、100U/mL青霉素和100mg/mL链霉素的DMEM，在37℃、5%CO2的培养箱中培养H9C2心肌细胞。……