侯 楠，刘 源，高 俊，王 晶

(南阳市第二人民医院 胃肠肿瘤科，河南 南阳 473000)

胃癌(gastric cancer，GC)是全球第五常见的癌，且由胃癌造成的死亡成为仅次于肺癌，为第二常见的癌相关死因[1]。目前，尽管在GC的治疗策略方面取得了明显进展，但GC的预后仍不太理想[2]。GC的预后不良与GC的转移密切相关，因此，研究影响GC转移的关键分子靶点具有重要意义。

微RNA(microRNAs，miRNAs)是一类短的非编码RNA，在众多肿瘤的发生和进展中发挥重要作用。miR-141-3p是miR-200家族的成员之一，在前列腺癌、结直肠癌和膀胱癌等肿瘤组织中呈下调趋势，且其发挥抑癌作用[3-5]。已有报道[6]表明，miR-141-3p能抑制GC细胞增殖，但其对胃癌细胞侵袭性的影响并不清楚。因此，本研究关注miR-141-3p对GC细胞迁移与侵袭的影响，并分析其中的机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞系与主要试剂:人胃黏膜细胞系(GES-1)和人胃癌细胞系(AGS)(中科院昆明细胞库)；胎牛血清(FBS)(Life Technologies公司)；Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)(Gibco公司)；miR-141-3p的模拟物(miR-141-3p mimic)和miRNA的阴性对照(miR-NC)(苏州吉玛基因股份有限公司)；程序性细胞死亡蛋白1(programmed cell death protein 1，PDCD1)过表达的慢病毒载体(LV-PDCD1)和空载体(LV-vector)(上海汉恒生物技术有限公司)；Lipofectamine 2000试剂(Invitrogen公司)；miRcute miRNA分离试剂盒、miRcute miRNA cDNA第一链合成试剂盒和miRcute miRNA RT-qPCR检测试剂盒(北京天根生化科技有限公司)；BCA蛋白定量试剂盒(江苏凯基生物技术股份有限公司)；荧光素酶报告基因载体、报告质粒和双荧光素酶试剂盒(Promega公司)；PDCD1抗体(Abcam公司)；RIPA裂解液、HRP耦合的二抗和超敏ECL发光试剂盒(上海碧云天生物科技有限公司)。

1.1.2 组织样本：收集南阳市第二人民医院2018年7月至2019年12月收治并接受胃癌根治术的患者的肿瘤组织和对应的癌旁非肿瘤组织(距侵润边缘约2 cm组织，病理形态学正常的非肿瘤组织)，共计19例。……