张锐

肾癌是泌尿系常见的恶性肿瘤之一[1]，针对肾癌的相关研究一直是人们关注的焦点，基于前期的研究成果，推测“在肾癌发病的过程中，MiR-23a调控着肿瘤增殖、凋亡、侵袭等过程，其作用的结合位点是靶基因HOXC8[2]。为了证实该假说，本研究通过体外、体内实验，采用MiR-23a inhibitor基因沉默的方法作为研究手段，观察MiR-23a及HOXC8在肾癌细胞株中的表达和MiR-23a对肾癌细胞的生物学影响，并在大鼠体内实验中进行验证，揭示MiR-23及HOXC8在肾癌细胞和组织中的表达规律[3]，以及MiR-23a在肾癌细胞的生物学作用，从新的角度揭示肾癌细胞发生、发展的新的机制，为源头防治肾癌提供新的思路及治疗靶点。

1 材料与方法

1.1 一般材料

选取2019年1月培养的大鼠60例，MiR-23a inhibitor转染组（实验组）20例，空载体转染组20例（阴性对照组），空白组20例（空白对照组）。所有大鼠均进行体内与体外两种实验方法。实施方法主要包括细胞培养、细胞转染、反转录反应、引物扩增、实时定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）实验方法、蛋白质免疫印迹（Western Blot）实验、动物实验等。

1.2 方法

（1）细胞培养：肾癌细胞株HK-2，786-O，CAKI-1均采用DMEM培养基培养，其内含1%青链霉素的双抗和10%始牛血清。置于5%二氧化碳、37℃细胞培养箱中常规培养，每2～3天传代一次，待细胞处于对数生长期用于实验。（2）细胞转染（适用于MiR-23a inhibitor）：①将对数生长期的HK-2，786-O,CAKI-1细胞，分别用胰酶消化，用完全培养基收集细胞，以3.0×105/孔的密度接种于六孔板，接种后将细胞混悬液摇匀，常规条件培养。②过夜培养过后的细胞，状态生长良好，融合密度达到50%～60%，进行转染。转染分为三组，每组均设复孔，以平衡实验误差。……