陈建军 王振军 赵宝成 李竹林

黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)作为组成炎症小体的一种关键蛋白，在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。编码AIM2的基因位于1q21，在恶性黑色素瘤中作为一种抑癌基因[1]。有研究指出，在多种实体肿瘤中AIM2的表达存在差异[2-6]。Dihlmann 等[7]通过组织芯片(TMA)技术分析了414例国外结直肠癌病人的肿瘤组织和癌旁组织，结果显示肿瘤组织与癌旁组织相比AIM2基因表达降低。但Liu等[8]使用QRT-PCR技术研究了40例中国病人，他们发现结直肠癌病人的肿瘤组织与癌旁组织中AIM2的表达无明显差异。我们使用荧光定量PCR和免疫组化技术来明确结直肠癌组织中AIM2的表达水平，分析AIM2的蛋白水平与结直肠癌病人的临床病理特征之间是否存在相关性。

对象与方法

一、对象

2015年6月～2016年6月间我院经手术治疗的原发性结直肠癌病人标本，其中包括64例新鲜冰冻组织标本，68例石蜡标本。入组条件：(1)均为原发性结直肠癌病人；(2)术前未接受放、化疗及其他新辅助治疗；(3)具有完整的临床病理结果；(4)标本采集均通过首都医科大学附属北京朝阳医院伦理委员会鉴定同意。分别留取病人肿瘤组织及距肿瘤组织3～5 cm处的癌旁组织标本。

二、方法

1.荧光定量PCR验证AIM2的表达：新鲜冰冻样品进行研磨裂解后，提取RNA并进行逆转录，采用的内参基因为GAPDH，目的基因AIM2的上游引物序列为GCAAGATATTATCGGCACAG，下游引物序列为GAGTTTGAAGCGTGTTGATC，荧光定量PCR的结果采用相对定量法2-ΔΔCt进行分析。

2.免疫组化：将固定后的组织石蜡包埋、4 μm厚连续切片，经过抗原修复、清除内源性过氧化物酶、血清封闭后，采用1∶500浓度的Anti-AIM2抗体进行一抗孵育，后滴加酶标抗鼠/兔聚合物，并通过DAB显色及复染后完成免疫组织化学染色。……