高春柳，赵胜杰，周晓翠，魏 荣，尼 博

（1.中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032；2.青岛嘉智生物技术有限公司，山东青岛 266000；3.黑龙江八一农垦大学，黑龙江大庆 163319；4.河南动物疫病预防控制中心，河南郑州 450000；5.中国兽医药品监察所，北京 100081）

A型塞内卡病毒（Senecavirus A，SVA）属于RNA 病毒科（Picornaviridae）塞内卡病毒属（Senecavirus）成员，目前仅有一个型[1]，与心病毒属（Cardioviruses）成员亲缘关系较近[2]。SVA感染可引起猪口鼻部及冠状带出现水泡样病变，同时可伴随跛行、厌食、嗜睡、皮肤充血、发热等症状，与口蹄疫（FMD）、猪水泡病（SVD）、水泡性口炎（VS）等疫病难以区分[3-4]。SVA 为单股正链RNA 病毒[5]，其基因组全长约7.3 kb，包含由666 个核苷酸组成的5'端非编码区（UTR）。非编码区后是1 个单一的长开放阅读框，编码2 181 个氨基酸组成的多聚蛋白，可被切割成12 个多肽，包括先导蛋白（L）、4 个结构蛋白（VP1、VP2、VP3、VP4）和7 个非结构蛋白（2A、2B、2C、3A、3B、3C、3D）。SVA 3'端非编码区有71 个核苷酸，后面连有poly（A）尾巴[6]。

反向遗传技术已经广泛应用于各类RNA 病毒研究。该技术可实现在分子水平上对病毒定向改造，为RNA 病毒基因功能及致病机理研究、新型疫苗研制等提供了有效方法[7-10]。RNA 病毒的主要反向遗传学方法是，基于质粒系统递送病毒全长cDNA，细胞内cDNA 能在RNA 聚合酶启动子的作用下被转录成为病毒RNA，这些RNA 随后被翻译成多肽并被加工为成熟的病毒结构与非结构蛋白，与病毒RNA 一起包装成具有感染性的病毒粒子。据报道[11-13]，已有的SVA 反向遗传平台构建主要基于酶切连接方法，这种方法是通过RT-PCR在体外扩增病毒基因片段，利用限制性内切酶，特异性地将片段逐个构建到质粒载体上，这种方法需要进行酶切、连接、单克隆鉴定、测序等复杂程序，出错率高，耗时较长。……