李乔，孙爱农，廖艳婷

(中山市中心血站 检验科，广东 中山 528400)

现今采供血机构采用的酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)合并核酸检测(nucleic acid testing，NAT)筛查模式能进一步缩短检测的“窗口期”，有效降低病原体因输血传播风险，保证血液的安全和质量。但由于现有的检测技术和病原体流行变化等因素，假反应性结果也随之存在，从而导致固定献血者流失、血源浪费以及对献血者生活造成困扰等一系列相关问题[1]。为保障血液安全，国家卫生健康委颁布了血站技术操作规程(2019版)[2]，明确具体血液检测项目和要求，为进一步维护献血者权益，近年来中国输血协会又发布《血液筛查反应性献血者归队指南》[3](下称《指南》)，指导和规范了献血者检测不合格后的归队工作。在常规两种不同厂家ELISA试剂盒(HBsAg、抗-HCV、HIV Ag/Ab、抗-TP)检测中，单试剂检测有反应性(阳性)而NAT为无反应(阴性)的献血者，其献血资格暂时屏蔽，进入献血者归队程序。本研究通过回顾分析当地献血者归队情况，为献血者血液检测及归队措施的制定提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象选取2018年1月至2020年6月在中山市中心血站参加无偿献血和血液检测ELISA项目单试剂检测阳性、NAT为阴性的献血者，符合《指南》者进入献血者归队流程，共计724名，其中男438名，平均(36.16±9.65)岁。资料来源于唐山启奥《现代血站管理信息系统V9.0》。

1.2 试剂与仪器

1.2.1试剂 (1)ELISA检测试剂：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒(ELISA法)(HBsAg，珠海丽珠试剂股份有限公司，国药准字S10910154；厦门新创科技有限公司，国药准字S10910148)；丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒(抗-HCV，珠海丽珠试剂股份有限公司，国药准字S20010014；北京万泰生物药业股份有限公司，国药准字S20143014)；人类免疫缺陷病毒抗原/抗体诊断试剂盒(HIV(Ag/Ab))(北京万泰生物药业股份有限公司，国药准字S20000024；法国伯乐生命医学产品有限公司，国药准字S20140049)；梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒(ELISA法)(抗-TP，珠海丽珠试剂股份有限公司，国药准字S20020012；厦门新创科技有限公司，国药准字S20000066；上海科华生物科技有限公司，国药准字S20010057)。其中抗-HCV试剂盒为第3代和第4代，其余均为第3代。(2)HBV、HCV、HIV(Ⅰ+Ⅱ型)核酸联合检测试剂盒(美国罗氏诊断产品有限公司，国药准字S20181014)，核酸质控品即标准物质[北京康彻思坦生物技术有限公司，GBW(E)090585，GBW(E)090576，GBW(E)090583]。严格按照试剂盒说明书操作。

1.2.2主要仪器 全自动加样仪(瑞士汉米尔顿公司，型号STAR-8ch；瑞士帝肯公司，型号EVO/8D)，全自动酶免分析仪(瑞士汉米尔顿公司，型号FAME24-20；德国西门子公司，型号BEPⅢ)，全自动核酸检测系统(瑞士罗氏公司，型号COBAS S201)。

1.3 研究方法

1.3.1献血者保留 对所有无偿献血者标本按国标常规血液检测，其中ELISA项目(HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP)均使用2种不同厂家试剂，若ELISA单一试剂阳性、NAT阴性的献血者，保留其献血资格并报废血液，屏蔽期间隔满6个月及以上可申请归队复查。

1.3.2献血者归队程序 主动提交归队申请的献血者进行健康征询，并签署知情同意书后采集1支5 mL EDTA-K2抗凝的静脉血。按照既往阳性项目与常规献血标本同时检测，经2种不同厂家ELISA试剂检测均阴性后，由授权人员审核并解除屏蔽，准许归队，恢复再次参加无偿献血资格。每位献血者可提交3次归队申请，每轮归队屏蔽期均为6个月，若经3次归队ELISA仍阳性，则献血资格永久淘汰。

2 结果

2.1 无偿献血者标本总检测情况总检测数为116 610，总项目不合格率为4.0%(4 626/116 610)。其中符合《指南》进入归队程序的献血者共724名，占0.6%(724/116 610)。截止2021年1月31日申请归队献血者共有170名，归队返回率占23.5%(170/724)。

2.2 ELISA单阳性检测项目情况分析

2.2.1单阳性各项目检测情况 单试剂总阳性率为0.6%(724/116 610)。其中HBsAg阳性率为26.5%(192/724)，抗-HCV阳性率为9.5%(69/724)，HIV-Ag/Ab阳性率为28.0%(203/724)，抗-TP阳性率为35.9%(260/724)。见表1。

表1 2018年1月至2020年7月单阳性各项目分类情况(n)

2.2.2单阳性献血者各项目归队和再次献血成功情况 申请归队人数占23.5%(170/724)，归队成功率占58.2%(99/170)，归队后再次申请献血的返回率占41.4%(41/99)，归队后再次申请献血的合格率占97.6%(40/41)，其中1名归队后再次献血检验ELISA合格、NAT阳性。见表2。

表2 2018年1月至2020年7月中山市单阳性献血者归队和再次献血情况(n)

2.3 单阳性献血者归队情况分析申请归队献血者与未归队献血者性别比较，差异无统计学意义(P>0.05)；申请归队献血者的年龄、献血次数均高于未归队献血者(P<0.05)。见表3。

表3 2018年1月至2020年7月单阳性献血者因素分析[n(%)]

3 讨论

目前血液筛查应用的ELISA检测方法虽然具有灵敏度高、操作简便等优点，但存在一定的假反应性。造成假反应性因素为多方面，不同的试剂生产厂家技术工艺存在差别，批间变异系数较大[1]，献血者自身干扰因素(如自身抗体、疫苗接种史、妊娠等)[4]，标本质量、仪器环境、人员操作及灰区设置不同等影响因素均可导致假反应性结果[5]。本研究显示再次复检合格率为58.2%(99/170)，说明ELISA单试剂反应献血者中50.0%以上为潜在的合格献血者。

表1显示，2018、2019、2020年抗-HCV单阳性发生率分别为11.7%、10.8%、1.5%，发生率变化较大，可能因为抗-HCV检测项目自2020年开始双家试剂均采用第四代ELISA试剂盒，代替以往一家第三代、另一家第四代，从而统一试验敏感性。ELISA第三代试剂盒采用间接ELISA法检测IgG类抗体，而第四代试剂盒采用双抗原夹心ELISA法能同时检测免疫球蛋白IgM和IgG类抗体，提高早期IgM抗体检出率，缩短检出病毒感染的“窗口期”[6]。同时第四代双抗原夹心ELISA法采用酶标抗原形成包被复合物，对待检抗体进行2次特异反应，有效避免与其他非特异性抗体吸附导致假反应性[7]。因此，第四代试剂能够增加检测灵敏度，降低假反应性发生率。

本次发现1例HBsAg单阳性献血者，经过6个月屏蔽期后，申请归队ELISA复检合格，再次参加献血ELISA仍为合格，但NAT阳性，显示该献血者可能处于病毒感染标志物检测阴性“窗口期”。ELISA与NAT相互补充检测，能最大限度防止因弱阳性及病毒变异等情况而导致的漏检[8]。NAT检测也存在一定的假反应性，针对此类情况，有研究建议增加抗-HBc检测[9]、不同核酸检测系统平行鉴定/拆分[10]等措施，以提高结果准确性。由此证明设置献血屏蔽期是非常有必要的，但对献血者应做好结果前后不一致的解释工作。检测中应尽可能排除导致假反应性相关因素，如排除其他仪器或标本的污染因素，定期评估和选择漏检率低的筛查试剂，有条件地区增加确证试验以作为归队的补充判定依据。

表3中，男性的归队意愿、成功率略高于女性，考虑女性人群因生理期、怀孕以及心理等方面影响因素多于男性。从献血者年龄来看，18～29岁人群中以在校大学生及外来务工人员居多，人员流动性较大，因此，该类人群主动申请归队率较低。30～49岁年龄段主动申请归队率较高，考虑该年龄段人群特点社会价值、责任感较其他年龄更为成熟，工作生活更为稳定等因素。归队人群以献血次数2次以上的献血者为主。献血经验越丰富的献血者，对无偿献血政策及知识、献血流程了解更多，因此，重复献血者主动归队意愿更为强烈，归队成功率越高，这与国外报道人群特点[11]相似。

目前本研究采用血站标准化信息管理系统，已建立归队献血者人员信息库。本研究再次献血返回率为41.4%(41/99)，低于广州地区的58.1%(825/1 420)[12]，介于其他地区24.6%(32/130)～42.7%(882/2 066)之间[13-14]。实际工作中发现超70%的献血者未申请归队。献血者对归队政策了解不足，献血成本较高(如交通)，且不同人群的受教育程度、心理等存在差异。因此，更进一步完善和细化归队献血者服务工作是非常有必要的。

建议制定不同项目或检测结果的告知模板和服务标准，规范和提高工作人员专业培训和服务意识，加强与归队献血者的沟通，解除其顾虑。对献血者解释检测结果时，充分了解献血者的需求，及时提供指引和帮助，增加专业心理护理，以减轻献血者心理负担和保障献血者权益。对延迟归队的献血者探讨可否适当增加召回次数，增加多种召回方法(如短信提醒、微信公众号平台预约等)，为献血者提供更有效和便捷的服务。通过定期随访关注献血者身心健康、加强献血法律法规和相关知识宣传等方式，以增加献血者信任度，促进献血者归队积极性和减少献血者的流失。