巩涛 魏传军 安明理 宁萌 周伏忠

摘要 为选育纳豆激酶（Nattokinase，NK）高活性菌株，从4种不同风味食品中分离得到26株菌株，通过酪蛋白平板初筛和液体发酵复筛，得到2株纳豆激酶高产菌株，利用分子生物学技术鉴定为2株枯草芽孢杆菌（ Bacillus subtilis ）。采用氯化锂-紫外与亚硝基胍（NTG）复合诱变的方式，最终获得1株纳豆激酶活性达到2 338.01 U/mL的高产菌株SD3-3-6，该突变菌株纳豆激酶酶活相较于初始菌株SD3提高了1.93倍，是1株具有应用前景的高产菌株。

关键词 纳豆;纳豆激酶;多肽;复合诱变;芽孢杆菌

中图分类号 Q 936.96  文献标识码 A  文章編号 0517-6611（2021）15-0159-03

Abstract In order to select nattokinase high activity strains， 26 strains were isolated from four different samples. Two nattokinase highyield strains were screened through primary screening and rescreening， and identified as two  Bacillus subtilis  strains by molecular biology technology. A highyield strain SD336 with nattokinase activity of 2 338.01 U/mL was obtained by lithium chloride UV and NTG compound mutagenesis. The final activity of nattokinase of SD336 was 1.93 times higher than that of the original strain SD3.

Key words Natto;Nattokinase;Polypeptide;Mutagenesis; Bacillus subtilis

基金项目 河南省科技攻关项目（212102310541）;河南省科学院科研项目（190305003、18JK16012）。

作者简介 巩涛（1982—），男，山东临沂人，助理研究员，博士，从事农业微生物学研究。

收稿日期 2021-01-03

纳豆激酶（natto kinase，NK）是纳豆在发酵过程中由枯草芽孢杆菌（ Bacillus subtilis ）产生的一种具有纤溶活性的丝氨酸蛋白酶[1]。大量研究结果显示，纳豆发酵过程中，不仅生成大量的短肽、多肽等具有特殊生理功能的生物活性肽，还能产生具有强溶栓功能的纳豆激酶，可以被开发为功能性食品、营养食品和天然药物等，具有广泛的应用前景[2-5]。纳豆激酶作为一种潜在的溶栓药物，与目前临床使用的链激酶、尿激酶等溶栓药物相比，除具有更好的安全性等诸多优点外，成本也更加低廉[6-10]。然而，目前国内筛选到的纳豆激酶菌种的产酶活性和国外相比还存在较大差距，国内报道的多数为500～3 200 U/mL[11-15]，如何分离与选育出纳豆激酶高活性菌种是亟需解决的问题。

笔者从4种纳豆与豆豉食品中分离得到了26株产纳豆激酶的菌株，对2株酶活较高的菌株通过氯化锂-紫外与NTG复合诱变的方法实施多次诱变，最终得到纳豆激酶酶活较高的高产菌株，旨在为纳豆激酶的生产奠定良好基础。……