李刚，刘明，王太鹏

作者单位：烟台龙矿中心医院外四科，山东烟台265700

骨肉瘤是儿童癌症病人死亡的最主要原因之一。常用的治疗方案为手术前后辅助化疗，但其生存率仍不足20%。唑来膦酸（ZOL）在癌症中的治疗作用得到普遍认可，但其在骨肉瘤中的作用机制尚未完全清楚。miRNA为一种短链非编码内源性微小RNA，其通过抑制或沉默靶基因转录蛋白过程，而发挥调控癌症发生发展的作用。miR-520a-3p虽在其他癌症中具有抑癌作用，但其在骨肉瘤中与唑来膦酸和T细胞特异性转录因子7（TCF7）的调控机制尚未有人报道。本实验旨在研究唑来膦酸对骨肉瘤细胞HOS增殖、迁移和侵袭以及其对miR-520a-3p、TCF7表达的影响，于2018年6月至2019年1月通过过表达miR-520a-3p、抑制miR-520a-3p对唑来膦酸处理的HOS细胞增殖、迁移和侵袭的影响，揭示其机制与唑来膦酸上调miR-520a-3p，抑制TCF7表达有关，将为唑来膦酸治疗骨肉瘤奠定理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料

人骨肉瘤细胞（HOS）购自美国ATCC；唑来膦酸（密固达，批号S0261，5 mg/100 mL）购自北京诺华制药有限公司；DMEM培养基、胎牛血清、噻唑蓝（MTT）、胰蛋白酶均购自美国Sellect公司；基质胶、Transwell小室购自美国Coming公司；双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自美国Promega公司；Lipofectamine2000、BCA蛋白定量试剂盒、逆转录试剂盒购自大连Takara公司。

1.2 方法

1.2.1

细胞培养以含10%胎牛血清的DMEM培养液培养HOS细胞，环境条件为37℃，5%二氧化碳。

1.2.2

细胞转染将ZOL（50 μmol/L）处理48 h的HOS细胞，标记为ZOL组；未做任何处理的HOS细胞，标记为对照组；将miR-con、miR-520a-3p mimics分别转染到HOS细胞48 h，分别标记为miR-con组、miR-520a-3p组；将anti-miR-con、anti-miR-520a-3p分别转染到HOS细胞48 h，再经50 μmol/L ZOL处理48 h，分别标记为ZOL+anti-miR-con组、ZOL+antimiR-520a-3p组；将……