王小言 夏鹰 金虎 陈伟明 陈晓东 聂柳 郑忠涛

(海口市人民医院神经外科，海南 海口 570208)

胶质瘤是常见的恶性肿瘤，有易转移、易复发、恶性程度高等特点，单纯的手术治疗难以彻底根治胶质瘤，术后辅助放疗、化疗等是目前常见的胶质瘤治疗手段，基因治疗是近年来受到广泛关注的治疗途径，也是目前研究的热点〔1〕。miRNA不仅参与机体正常生长发育，调控细胞的生长、分化等过程，还与人类的多种疾病发生有关，例如心血管系统疾病、免疫系统疾病、神经系统疾病及肿瘤〔2,3〕。miR-4295是最近研究发现的与肿瘤有关的miRNA，在肺癌、膀胱癌等肿瘤中扮演促进作用，miR-4295能促进肿瘤细胞的生长和侵袭〔3～5〕。miR-4295在胶质瘤组织中过表达，并且其表达水平与患者的临床分期有关〔6〕。现阶段对miR-4295在胶质瘤中的作用尚不明确。本实验探讨下调miR-4295对胶质瘤细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的影响和靶向调控机制，为基因靶向治疗胶质瘤及明确miR-4295在肿瘤中的作用提供参考。

1 材料与方法

1.1材料 胶质瘤U251细胞购自美国ATCC；miR-4295 inhibitor、inhibitor control、miR-4295 mimics、mimics control均由上海吉玛制药技术有限公司构建；CDKN1A抗体购自生工生物工程(上海)股份有限公司；CDKN1A siRNA、siRNA control由上海吉凯基因化学技术公司构建；Lipofectamine2000购自美国Invitrogen；荧光素酶报告载体由汉恒生物科技(上海)有限公司构建；Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒购自杭州联科生物技术股份有限公司。

1.2方法

1.2.1细胞转染及分组 胶质瘤U251细胞分为control组(未转染)、anti-NC组(转染inhibitor control)、anti-miR-4295组(转染miR-4295 inhibitor)，细胞转染操作步骤同Lipofectamine2000转染试剂。

1.2.2qRT-PCR检测下调效果 取培养48 h后的control组、anti-NC组、anti-miR-4295组细胞，添……