张 可，薛姣雄，喻 娇，唐青海※，曾繁荣，刘雪晴，隆泽桧，侯鑫军

(1.南岳山区生物资源保护与利用湖南省重点实验室，衡阳师范学院生命科学与环境学院，湖南衡阳421008；2.衡阳市畜牧水产事务中心，湖南衡阳421008)

犬瘟热病毒（Canine Distemper Virus，CDV）引起的犬瘟热（Canine Distemper，CD）传染性极高，临床症状的表现多样，各种年龄和性别的犬都会感染CDV，发病率高，染病的幼犬死亡率可达30%～80%[1,2]。CDV于1809年以来在世界范围内广泛流行，同年由Jeneer首次报道，1905年Carre发现其病原为一种病毒，1951年Dedie由组织培养方法分离得到CDV[3,4]。犬瘟热病毒的H基因是研究CDV变异情况的主要目的基因，H蛋白为CDV囊膜糖蛋白，具有血凝素功能，是病毒入侵宿主的重要调节蛋白，H基因变异会引起CDV的毒力变异，是最适合做CDV基因改变监测的基因[5,6]。

免疫接种是犬瘟热的预防控制主要手段，但曾经出现过免疫后的犬也感染了CDV的情况[7]，且很多临床检测和分离的CDV毒株与疫苗株具有很高的同源性及亲缘关系[8,9]，而弱毒疫苗是国内外使用最为广泛的犬瘟热疫苗，所以建立一种能鉴别CDV强弱毒株的检测方法至关重要。目前，能同时鉴别CDV强毒株和弱毒株的检测方法较少，研究最广泛的是聚合酶链反应（PCR）技术[10,11]，其高效灵敏，特异性强。除了PCR技术，目前已经被用来鉴别CDV强弱毒株的方法还有环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）[12]，在60℃～65℃的条件下进行15～60分钟左右的恒温扩增，具有操作简单、特异性强、产物易检测等特点。

本试验主要根据CDV强毒株与弱毒株H基因的保守区域分别设计了2对特异性引物，通过优化PCR扩增反应的反应体系与反应程序来探寻最优的反应条件，从而建立一种犬瘟热病毒强弱毒株鉴别PCR的检测方法。……