袁 晓，王 欢，丁 铲，廖 瑛

（中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241）

VCP（Valosin-containing protein），即含缬酪肽蛋白，是三磷酸腺苷酶超家族中的一员，在不同物种中具有高度的同源性[1-2]。VCP参与蛋白降解、膜融合、DNA修复与复制、调控细胞周期，激活NF-κB信号通路等生理活动，并具有抗细胞凋亡、启动转录因子及参与细胞内吞等作用[3]。已有文献报道，VCP与内吞小体复合物相结合，在膜融合和囊泡转运过程中发挥着重要作用[4]。干扰VCP的表达导致内吞小体体积增大，不能成熟[5]。

禽传染性支气管炎（avian infectious bronchitis，IB）是鸡群的急性、高度接触性的传染性疾病，由禽传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus，IBV）感染引起，属于禽类的四大病毒性疾病之一，给养禽业带来了巨大的经济损失[6-7]。研究发现，IBV发生感染和进入宿主细胞时，依赖网格蛋白内吞方式进入细胞，依次通过早期内体、晚期内体、溶酶体，在酸性环境中发生膜融合，释放病毒基因组进入细胞质[8]。因此，内体的成熟在IBV的感染中起到重要的作用。已有研究表明：干扰VCP的表达，导致入胞的IBV滞留在早期内体，不利于IBV的复制和增殖[4]。本研究通过干扰或外源表达VCP，检测IBV的基因组复制水平和蛋白表达水平，并检测VCP的亚细胞位置，进一步证实VCP在IBV感染和增殖中发挥的作用。

1 材料与方法

1.1 病毒、细胞和试剂IBV（Beaudette株）由华南农业大学刘定祥实验室赠予；Vero细胞和HeLa细胞由本实验室保存；siRNA购自吉玛生物公司；VCP抗体和β-actin抗体购自CST公司；IBV-N蛋白抗体由刘定祥实验室赠予；Rab5、Rab7、LAMP1抗体购自CST公司；FuGENE转染试剂购自Promega公司；Lipofectamine 2000购自赛默飞公司；……