克罗诺杆菌属快速检测体系的建立
2021-08-31王丹丹杨艳歌刘鸣畅王洪越吴淑清吴亚君
王丹丹,李 莉,杨艳歌,刘鸣畅,王洪越,吴淑清,袁 飞,*,吴亚君,*
(1.中国检验检疫科学研究院,北京 100176;2.长春大学食品科学与工程学院,吉林 长春 130022)
克罗诺杆菌属(Cronobacterspp.)是一种重要的食源性病原体,其存在于土壤、水以及人和动物肠道中[1-3]。对于婴儿,尤其是体质量低于2 500 g的早产儿[4-5],具有很高的感染风险。克罗诺杆菌属与新生儿脑膜炎病例、坏死性小肠结肠炎、败血症、血痢和脑脓肿相关[6-8]。有研究表明,克罗诺杆菌能在婴儿奶粉中长期存活[9],因此对克罗诺杆菌属的及时检出是预防其危害发生的重要手段。
传统微生物生理生化法检测时间长,且检测步骤繁琐[10-11],因此近年来众多研究者对微生物快检技术进行了探索研究,目前市面上微生物快检产品主要有即用型微生物快速检测板[12]、显色培养基[13-14]、ATP荧光检测仪[15-17]、胶体金免疫层析试纸条[18-19]、进口的微生物快速检测系统等[20-22]。但是微生物测试片、快速检测板、显色培养基都需要进行长时间的增菌过程[23-24],因此检测时间较长,无法实现微生物快速检测。ATP荧光检测法对检测样品基质要求较高,大多应用于水质检测以及环境微生物的检测,无法对食品等复杂基质样品进行微生物检测[25-26]。胶体金免疫层析试纸条其检测限为106CFU/mL,检测灵敏度较差[24,27],导致其应用受到限制。目前进口的微生物快速检测系统,虽然样品前处理简单,但其设备成本较高,且也需要增菌过程,故检测时间较长。
实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)技术是在普通PCR基础上添加荧光染料或荧光探针[28],通过PCR产物的积累,使得荧光信号增加[29-30]。……
