陈静陈桂信叶乃兴黄先洲潘玉华杨晓滨

(1.宁德职业技术学院生物技术系,福建 福安 355000;2.福建农林大学园艺学院,福建 福州 350002)

白茶萎凋工序是水分逐步散失过程，细胞渗透调节作用下，细胞膜渗透性发生明显改变，引起生化及内质成分的变化，各特征性次生代谢产物酚类物质[1-4]、咖啡碱[5-7]、茶氨酸[8,9]、萜烯类香气物质[10-12]代谢途径中的关键酶及相关基因共同决定白茶品质形成，已陆续在NCBI数据库登录相关基因的序列信息及相关功能注释。本研究从白茶萎凋芽叶-新鲜芽叶正向文库中分离获得了S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、磷酸-2-脱氢-3-脱氧庚糖酸醛缩酶(DAHPS)，并对基因序列进行了生物信息学分析，为以后研究白茶品质形成分子形成机理奠定了基础。

1 材料与方法

1.1 材料

供试品种为国家级审定茶树良种“福鼎大白茶”，种植于福建农林大学南区茶学教学基地种质资源圃，按传统白茶加工工艺进行萎凋，室内自然萎凋温度22～25℃，空气相对湿度70%～75%，分别称取0.1000g的鲜叶(萎凋处理0h)和萎凋处理4h、8h、16h、24h、32h、40h、48h、52h的叶片，共9个样品，设3次重复，经液氮速冻后置-80℃冰箱保存备用。

1.2 试验方法

1.2.1 白茶萎凋叶与鲜叶正向抑制差减杂交cDNA文库的构建

各取萎凋芽叶与新鲜芽叶样品总RNA为模板，参考俞滢[13]的方法构建文库。

1.2.2 白茶萎凋叶与鲜叶差异基因阳性克隆的筛选

反向Northern-blotting中探针的制备、点膜、预杂交、杂交、显色等步骤，参照俞滢[13]的方法和Roche公司的DIG High Prime Labeling and Detection Starter Kit I(Version 13)试剂盒的说明书进行，根据反向Northern-blotting的结果，挑取阳性克隆进行培养，用于测序。……