张洪英，梁瑞，曹长顺，柯宗文，杜益茗，杨艳凤，梁艳明

（1.锦州医科大学，辽宁 锦州121000；2.锦州市中医院，辽宁 锦州121000；3.锦州市中心医院，辽宁 锦州121000）

卵巢早衰（premature overian failure,POF）是<40 岁女性因卵泡耗尽或停止发育所致卵巢功能减退到一定阶段所呈现的疾病状态[1]。导致POF的因素很多，如化疗或放疗、医源性因素、遗传变异、自身免疫性卵巢萎缩、各种环境因素（病毒、毒素和吸烟）等[2]。顺铂是目前应用最为广泛的化疗药物之一，能损伤卵巢功能结构[3-4]，严重影响女性的身心健康。激素替代疗法已成为治疗POF 的首选方案，但也存在很大的致病风险。近年来由于化疗药物的广泛应用，使POF 的发病率逐年上升。对患有恶性肿瘤的育龄女性患者来说，化疗损伤性腺功能，是导致POF 的一个重要原因。随着恶性肿瘤育龄女性患者远期生存率的升高，为满足这些患者的生育需求及提高其生活质量，临床需要寻找新的治疗POF 的方法。葛根素是从葛根中提取的主要成分[5]，具有与植物雌激素大豆异黄酮相似的化学结构[6]，而且有抗凋亡的作用[7]。葛根素在治疗POF的研究报道甚少。本研究应用顺铂诱导复制小鼠卵巢早衰模型，探讨葛根素对顺铂诱导小鼠卵巢早衰的作用，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物选取30 只6 周龄雌性C57BL/6J小鼠，体重19～24 g，购自北京围通利华实验动物技术有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK（京）2016-0006，1100111911080486。所有小鼠在SPF 级动物实验中心饲养，自由进食饮水，室温20～23℃、湿度50%～65%，12 h/12 h 昼夜交替光照。小鼠随机分为对照组、模型组及实验组，每组10 只。所有实验操作均符合锦州医科大学动物伦理委员会要求。

1.1.2 药物和试剂顺铂粉剂（购自美国Sigma 公司），葛根素注射液（购自成都天台山制药有限公司），Cleaved caspase-3 多克隆抗体、Bcl-2 多克隆抗体、Bax 多克隆抗体（购自美国Abcam 公司），山羊血清、过氧化氢、PBS、柠檬酸、柠檬酸钠、荧光二抗、PI、抗荧光衰减封片剂（购自北京中山生物技术有限公司），小鼠E2、FSH、AMH 的酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒（购自江苏酶标生物公司），DAB 显色试剂盒（购自上海碧云天生物公司）。

1.1.3 实验仪器BT224S 电子秤、PB-21PH 仪（德国赛多利斯有限公司），LEICA-TP1020 全自动脱水机、LEICA-EG-115OH 包埋机、低温超速离心机（德国徕卡公司），SZX-7 体视显微镜、BX41 正置荧光显微镜（日本奥林巴斯公司），酶标仪（英国Biochrom Anthos 公司），光学显微镜（德国莱卡公司）。

1.2 方法

1.2.1 动物模型的复制小鼠给药途径均为腹腔注射。模型组先给予9 d 生理盐水（4.0 ml/kg），再给予5 d 顺铂（4.5 mg/kg）及生理盐水（4.0 ml/kg）。实验组先给予9 d 葛根素（200.0 mg/kg），再给予5 d葛根素（200.0 mg/kg）及顺铂（4.5 mg/kg）。对照组给予同体积生理盐水14 d。实验第9 天时，称重小鼠并记录，观察小鼠的活动、饮食及皮毛光泽度。实验第15 天脱颈处死所有小鼠，迅速心尖取血，3 000 r/min 离心15 min，取上清液待测。……