白明月 孙高贵 张作鹏 赵仁玉 王小康 王方昆 常维山 庚承芳 张劲 梁潇 米雪丽 王金纪

摘  要：本文调查了部分山东省境内种鸡场、孵化场死亡鸡胚中的细菌感染情况，结果表明，感染率孵化场死胚细菌分离率最高的达100%，最低的为20%。从种鸡品种来看，817肉杂鸡种蛋质量最差，沙门氏菌感染率在0%～70%，三黄鸡13%～20%，快速麻鸡17%，平均死胚细菌感染率为50%左右。药敏试验表明，安普霉素和恩诺沙星敏感性较高，联合药敏实验表明，痢菌净与金霉素、强力霉素、安普霉素、阿莫西林都有良好的配伍效果，替米考星与金霉素、强力霉素、阿莫西林的联合用药也有较好的配伍效果。

关键词：死鸡胚;细菌感染;调查;药敏试验

中图分类号：S858.511.31+3        文献标识码：B        文章编号：1673-1085（2021）6-0037-05

近年来，各种国产肉杂鸡在山东省都有了快速发展。但是由于国产肉杂鸡种鸡场管理相对落后，种鸡垂直传播疾病净化不够彻底，影响了肉杂鸡雏鸡的质量和养殖效益。为了调查山东省肉杂鸡雏鸡带菌情况，我们调查了部分山东省境内种鸡场、孵化场死亡鸡胚中的细菌感染情况，并对分离鉴定的细菌进行了药敏试验和联合药敏试验。现将结果报告如下：

1 材料方法

1.1 胚胎来源

收集规模化817种鸡场、三黄鸡种鸡场、快速型麻种鸡所属孵化室中未能正常出壳的完整死鸡胚种蛋20～30枚/场。

1.2 培养基

麦康凯培养基、营养琼脂培养基、鲜血培养基，购自青岛海博生物技术有限公司。

1.3 细菌分离培养

首先用消毒剂将鸡胚洗净，用酒精将鸡胚气室处进行再次消毒。拨开气室处鸡蛋壳，撕开壳膜，用取菌环勾取鸡胚内容物，在上述三种培养基划线分离，37 ℃过夜培养。

1.4 细菌鉴定

在麦康凯培养基上生长的红色菌落可判定为大肠杆菌或肠杆菌;淡黄色半透明菌落为可疑沙门氏菌。在营养琼脂培养基上呈半透明的淡绿色菌落，且在献血培养基呈α溶血的为绿脓杆菌。在营养琼脂培养基上呈不透明的白色菌落，且在鲜血培养基上无?溶血环的球菌为白色葡萄球菌;在营养琼脂培养基上呈不透明的淡黄色菌落，且在鲜血培养基上有?溶血环的球菌为金色葡萄球菌。可疑沙门氏菌利用质谱微生物鉴定仪（Bruker）鉴定细菌种类[1]。

1.5 药敏试纸

将分离培养的部分细菌采用纸片法（K-B法）进行药敏试验（药敏试纸购自杭州微生物试剂有限公司）。

1.6 药敏试验

按照参考文献[2]，勾取少许分离鉴定的细菌培养物，溶解到到1 mL生理盐水中，涂布营养琼脂平板，粘贴相应药敏试纸后，37 ℃过夜培养。测量抑菌圈直径。

1.7 联合药敏试验

按照1.6粘贴药敏试纸后，在药敏试纸片上再叠加上一个配伍用药的药敏试纸片作为基础配伍药物（打底药物）。本研究选择金霉素、强力霉素、安普霉素和阿莫西林为打底药物，与氟苯尼考、恩诺沙星、新霉素、痢菌净和替米沙星两两组合，叠加在一起，37℃ 过夜培养。测量抑菌圈直径。

2 结果

2.1 细菌分离鉴定结果

在所有收集的鸡场死鸡胚中均或多或少地可以分离到不同种类的细菌，结果见表1。由表1可以看出，大肠杆菌的分离率最高，沙门氏菌其次，绿脓杆菌第三，平均感染率为50%左右。感染率最高的孵化场死胚细菌分离率达100%，最低的为10%。从种鸡品种来看，817肉杂鸡质量变化很大，沙门氏菌感染率在0%～70%（平均23.4%），三黄鸡沙门氏菌感染率在13%～20%（平均16%），快速麻鸡约为17%。

2.2 药敏试验

对分离鉴定的部分细菌进行了药敏试验。结果表明，所有分离鉴定的细菌都有耐药性，具体试验结果见表2。由表2可以看出，耐药性最强的细菌可耐受9种药物，最少的也可耐受3种。敏感性最高的药物为安普霉素和恩诺沙星，最低的是痢菌净。

2.3 联合药敏试验

2.3.1 强力霉素为基础药物的联合药敏试验 结果见表3。由表3可以看出，强力霉素与新霉素、替米考星和痢菌净配伍，均有较好结果。

2.3.2 金霉素联合药敏实验 金霉素与恩诺沙星等药物的联合药敏试验结果见表3。由表3可以看出，金霉素与替米考星和痢菌净等药物有较好的联合用药结果。

2.3.3 安普霉素联合药敏试验 安普霉素与恩诺沙星等药物的联合药敏试验结果见表4。由表4可以看出，安普霉素与替米考星和痢菌净等药物有较好的联合用药效果。

2.3.4 阿莫西林联合药敏试验 阿莫西林与恩诺沙星等药物的联合药敏试验结果见表5。由表5可以看出，阿莫西林与替米考星和痢菌净等药物有较好的联合用药结果。

2.4 多种药物组合敏感细菌统计 9种药物两两组合药敏试验结果见表6。由表6可以看出，痢菌净的联合用药敏感率最高，可达85.7%;替米考星第二，82.1%;强力霉素和新霉素都是71.4%。

3 讨论

种鸡感染沙门氏菌后，可通过种蛋垂直传染给雏鸡，严重者可造成死胚。种蛋上孵前如果未进行消毒或消毒不严格，附着在种蛋表面的细菌可通过蛋壳的气孔感染鸡胚，造成雏鸡带菌或死胚。本研究表明，所有孵化场的死胚中都或多或少携带有不同种类的细菌，其中大肠杆菌感染率最高。大多数孵化场的死胚中携带沙门氏菌，但是感染率差别较大，说明山东省肉杂鸡种鸡质量参差不齐、良莠不一。经追踪调查，污染最严重的是孵化室，经加强种蛋消毒后，孵化率已有明显提高。本试验结果还表明，死胚中携带的大肠杆菌、沙门氏菌都具有多重耐药性，敏感性较高的药物是安普霉素和恩诺沙星，但是达不到100%敏感。联合用药具有更确切的防治效果，本研究表明痢菌净与强力霉素、阿莫西林等药物有协同作用;替米考星与强力霉素、阿莫西林等药物联合，能提高对所试细菌的抑菌效果。肖建光[3]等的研究结果表明，痢菌净与阿莫西林联合用药对禽源沙门氏菌具有协同作用;吴群[4]的研究结果表明，替米考星与强力霉素具有协同作用，与本研究结果一致。强力霉素和新霉素仍然不失为良好的基础配伍药物，但是有效率不及替米考星和痢菌凈，氟苯尼考已降到最差。雏鸡到达饲养现场，可考虑使用这些药物作为开口药。

参考文献：

[1] 王卫萍，奚海燕，黄梅，等.基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在临床病原菌鉴定中的应用[J].临床检验杂志，2015，33（5）：337-340.

[2] 邱令法，裴碧娜.产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检测和耐药性分析[J].检验医学，2012，27（5）：421-423.

[3] 肖建光，常维山.联合用药对禽源沙门氏菌的体外抑菌试验[J].家禽科学，2009（11）：33-36.

[4] 吴群，黄楠，刘贝欣，等.六种抗菌药单用与联合应用对大肠杆菌的体外抑菌效果观察[J].黑龙江畜牧兽医，2018（10）：88-91.