周丹，李惠贞，黄涛，张德明，谷大伟

（深圳市中医院 检验科，广东 深圳 518033）

0 引言

女性生殖道感染是常见妇科病，常因沙眼衣原体（CT）、淋病奈瑟菌（NG）、生殖支原体（MG）、解脲脲原体（UU）等病原微生物感染所致。可通过性行为、血源、母婴等方式传播，因女性生殖道较为脆弱，感染可致妇科肿瘤、流产、不孕不育、月经不调等严重并发症，危害女性健康[1]。实时荧光核酸恒温扩增技术（SAT）融合核酸恒温扩增技术及实时荧光检测技术，具备灵敏度高、特异性高、样本被污染风险低等特点，可迅速、准确地检测各类病原体[2]。本次研究通过对本院近一年女性生殖道感染患者进行SAT 检测，以观察生殖道感染患者中CT、NG、MG、UU4 类病原体感染情况。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2019 年1 月至2020 年2 月我院就诊的生殖道感染女性患者的宫颈分泌物或尿液标本共95份。患者20～55 岁，平均（37.63±8.32）岁；病程4～17d，平均（8.74±1.36）d。纳入标准：①符合生殖道感染诊断标准者[3]；②伴有尿痛、腹痛、白带异常增多等生殖道感染临床症状；③经医学伦理会批准且患方签署知情同意书者。排除标准：近1周内有性生活史者。

1.2 样本采集方法

由妇科医生采用酒精棉球于宫颈表面擦拭清洁消毒后，使用无菌棉棒伸入宫颈内旋转1 周并停留10s 后收集宫颈分泌物，放入生理盐水中密封。尿液标本由患者自行留取送检。

1.3 试剂及仪器

CT、NG、MG、UU 核酸恒温扩增检测试剂盒由上海朗赋实业有限公司提供[国食药监械(准)字2014 第3400925 号]，采用罗氏cobas z480 荧光定量PCR 仪进行检测。

1.4 检测方法

参照试剂盒说明书设定阴性及阳性对照，将样本与核酸提取物混匀，保持温度60℃放置5min，于室温静置10min 后放于磁珠分离器上5min，洗涤两次后保留磁珠与RNA 结合体并加入核酸反应液，并移至PCR 仪中，设定温度60℃放置10min 后降温至42℃放置5min，并添加42℃的SAT 酶液，保持温度，实施恒温扩增40min。选择羧基荧光素作为荧光标记，设定温度42℃，每分钟收集1 次荧光信号，依照实时获得的荧光信号出现的时间及强度得到检测的病原体结果。

1.5 观察指标

观察以上4 种病原体阳性检出率及其混合感染率，并分析比较不同临床诊断及不同年龄段患者中各病原体检出率结果差异。

1.6 数据分析

2 结果

2.1 4 种病原体阳性检出率比较

95 例患者中，4 种病原体均有阳性检出率，单纯一种病原体感染64 例（67.37%），其中UU29 例（30.53%），CT16 例（16.84%），NG11 例（11.58%），MG8 例（8.42%）；混合2 种或3 种病原体感染患者有31 例（32.63%）。

2.2 4 种病原体混合感染率比较

在31 例混合2 种或3 种病原体感染中，CT+UU混合感染占比最高，共计14 例（14.74%），详见表1。

表1 4 种病原体混合感染率比较[n（%），n=95]

2.3 不同诊断患者中各病原体检出率比较

在不同临床诊断中，诊断为阴道炎患者中UU 检出率显著高于宫颈炎及盆腔炎，差异具有统计学意义（P<0.05），MG、NG 及CT 检出率比较，差异无统计学意义（P>0.05），见表2。

表2 不同诊断患者中各病原体检出率比较[n（%）]

2.4 不同年龄段患者中各病原体检出率比较

在不同年龄段中，年龄段在36～45 岁之间女性生殖道感染者中UU 阳性检出率显著高于其他年龄段（P<0.05），CT、NG 及MG 检出率比较无明显差异（P>0.05），见表3。

表3 不同年龄段患者中各病原体检出率比较[n（%）]

3 讨论

女性生殖道感染可增加HPV 及HIV 入侵的风险，还将影响其生育能力，严重威胁女性生命安全及心理健康[4]。给予快速、精确的诊断以便于患者及时得到相关治疗，是目前临床工作重要目标。

既往临床检测生殖道感染病原体常采取阴道分泌物或宫颈分泌物直接涂片，但缺乏敏感度及特异性，检测结果准确度较低[5]。微生物培养法作为感染性疾病诊断金标准虽具有较高敏感度及特异性，但耗时长且成本高，不适宜临床应用[6]。聚合酶链反应检测则是对病原体DNA 进行检测，但因DNA 稳定性较高，在检测时可出现假阳性，影响临床诊断[7]。SAT 技术将患者标本放置于RNA 保存液中，可防止RNA 降解，通过磁珠提取病原体RNA，将具有活性的病原体RNA 逆转录为cDNA 并与带有荧光标记的探针特异性结合，通过仪器可直观检测病原体RNA扩增循环情况，通过阳性及阴性对照，提高了检测的灵敏度及特异性，可同时对CT、NG、MG、UU 进行检测，在减少污染的同时缩短检测耗时[8]。

本次研究结果显示95 例患者中，4 种病原体均有阳性检出率，单纯一种病原体感染64 例（67.37%），其中UU29 例（30.53%），CT16 例（16.84%），NG11例（11.58%），MG8 例（8.42%）；混合2 种或3 种病原体感染患者有31 例（32.63%）；在31 例混合2种或3 种病原体感染中，CT+UU 混合感染占比最高，共计14 例（14.74%）；诊断为阴道炎患者中UU 检出率显著高于宫颈炎及盆腔炎，差异具有统计学意义，MG、NG 及CT 检出率比较，差异无统计学意义。这说明UU 是女性生殖道感染的主要病原体，且主要分布于患者阴道。分析原因认为UU 依靠自身携带的尿素酶，依靠分解尿素为其提供代谢所需能源。由于女性生殖道生理特征，UU 更易高度定居于女性阴道，且感染者多因无自觉症状而延误治疗，导致女性生殖道感染患者中UU 阳性检出率较高[9]。本次研究结果还发现年龄段在36～45 岁之间女性生殖道感染者中UU 阳性检出率显著高于其他年龄段，CT、NG及MG 检出率比较无明显差异。这表明36～45 岁女性是生殖道感染高危人群，这可能因此年龄段人群处于性活跃期，且因相关健康知识缺乏，不注重性生活前后生殖道的清洁，从而导致病原体侵入感染。因此，医务工作者应全面开展女性生殖道感染健康宣教，此外女性也应注意保持外阴清洁，性生活前后彻底清洗外阴，定期检查，避免过早不洁性交[10-12]。

综上所述，SAT 技术在女性生殖道感染中具有较好的应用效果，耗时短、成本低、污染小，具有较高的临床推广价值。